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baby1_9253344

金虫 (小有名气)

[求助] 帮忙评价一下PCR引物

模板基因210bp,想要通过菌落pcr把模板基因P出来,设计的上下游引物自己加了酶切位点和保护碱基,初次设计引物,自己摸索着用oligo 评价了一下,但是出来的指标不知道是好是坏,贴出来请大家帮忙评价一下。
上游引物(33bp):5‘-GGGAATTC+NedI酶切位点+......
下游引物(27bp): 5’-GCC+HindIIII酶切位点+......

上下游引物不一样长,可以吗?如果要补成一样长,是增加保护碱基这边,还是从3端延长?谢谢各位啦~



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imyting

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
baby1_9253344(金币+2): ★★★很有帮助 3Q 2011-12-29 16:07:41
西瓜(金币+2): good 2011-12-29 17:33:08
既然在质粒上,为什么不先提质粒再进行PCR呢?那样不是更好。一般来说,在引物结尾应该选用一些前两个碱基就能决定氨基酸种类的密码子,选用前两个,如CU*编码的一定是亮氨酸,你引物以CU结尾就比较保守了,但是不是一定的
悠哉游哉做实验,成兮败兮我随便
9楼2011-12-29 14:18:12
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sean-u

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
baby1_9253344(金币+1): 有帮助 谢谢~ 2011-12-27 19:32:59
西瓜(金币+1): 同感…… 2011-12-28 13:12:26
我觉得TM值太高吧
人生就是不停的战斗!
2楼2011-12-27 19:13:41
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baby1_9253344

金虫 (小有名气)

3楼2011-12-28 10:03:10
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baby1_9253344

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by baby1_9253344 at 2011-12-28 10:03:10:

4楼2011-12-28 20:30:21
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