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baby1_9253344

金虫 (小有名气)

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[求助] 帮忙评价一下PCR引物

模板基因210bp，想要通过菌落pcr把模板基因P出来，设计的上下游引物自己加了酶切位点和保护碱基，初次设计引物，自己摸索着用oligo 评价了一下，但是出来的指标不知道是好是坏，贴出来请大家帮忙评价一下。
上游引物（33bp）：5‘-GGGAATTC+NedI酶切位点+......
下游引物（27bp）： 5’-GCC+HindIIII酶切位点+......

上下游引物不一样长，可以吗？如果要补成一样长，是增加保护碱基这边，还是从3端延长？谢谢各位啦~

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1楼 2011-12-27 19:07:04

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baby1_9253344

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引用回帖:

楼: Originally posted by imyting at 2011-12-29 14:18:12:
既然在质粒上，为什么不先提质粒再进行PCR呢？那样不是更好。一般来说，在引物结尾应该选用一些前两个碱基就能决定氨基酸种类的密码子，选用前两个，如CU*编码的一定是亮氨酸，你引物以CU结尾就比较保守了，但是不 ...

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