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wwb95599

铜虫 (小有名气)

[求助] RAPD产物回收总是三条带,求解决办法

PCR产物回收,纯化后,1%琼脂糖电泳,可是总有三条带,请问该如何解决?(目的条带大约600bp)
回收中间那条带
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只要路是对的,就不怕路远.
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wwb95599

铜虫 (小有名气)

另:上下两条带的大小差异不大(没有100BP)
只要路是对的,就不怕路远.
2楼2011-12-26 15:35:29
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世外清风

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wwb95599(金币+3): 有帮助 跑胶时候指示剂都快到底了. 2011-12-27 14:12:28
西瓜(金币+2): 鼓励应助 2011-12-27 17:35:29
楼主这貌似不止3条啊,每次回收结果都这样的话可能不是污染,是不是楼主没等他跑开就切了啊,多跑会再切切看

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

3楼2011-12-27 08:41:43
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世外清风

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

wwb95599(金币+1): 有帮助 2011-12-27 14:11:01
还有会不会是你最后溶解的水被污染了,你都换换看下
4楼2011-12-27 08:47:37
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wwb95599

铜虫 (小有名气)

送鲜花一朵
引用回帖:
: Originally posted by 世外清风 at 2011-12-27 08:41:43:
楼主这貌似不止3条啊,每次回收结果都这样的话可能不是污染,是不是楼主没等他跑开就切了啊,多跑会再切切看

这是RAPD扩增出来的带,所以有很多带.我要回收的是中间那条.
只要路是对的,就不怕路远.
5楼2011-12-27 14:03:55
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wwb95599

铜虫 (小有名气)

wwb95599: 回帖置顶 2011-12-27 14:05:48
引用回帖:
2楼: Originally posted by wwb95599 at 2011-12-26 15:35:29:
另:上下两条带的大小差异不大(没有100BP)

这是回收后的带图,(左边是Marker,右边那两条是回收的)有三条带!


只要路是对的,就不怕路远.
6楼2011-12-27 14:05:41
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wwb95599

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
: Originally posted by 世外清风 at 2011-12-27 08:47:37:
还有会不会是你最后溶解的水被污染了,你都换换看下

这是用试卷盒回收的,溶解的用的是Eluent,PCR后跑完胶观察,是没有污染的.所以应该不是污染的问题.
我最想知道的是,因为那三条带大小相差不大,所以切胶时候可能给上下两条都带了些.怎么样才能使将相差不大的那些带分得更开,这样切起来就方便些.
只要路是对的,就不怕路远.
7楼2011-12-27 14:10:07
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世外清风

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


西瓜(金币+1): 确实 2011-12-27 17:36:17
wwb95599(金币+2): ★★★很有帮助 2011-12-28 12:29:11
胶浓度做大点,多跑一会就可以分开了
8楼2011-12-27 15:21:53
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wwb95599

铜虫 (小有名气)

★ ★
wanhscn(金币+2): 鼓励及时反馈! 2011-12-27 17:28:58
引用回帖:
8楼: Originally posted by 世外清风 at 2011-12-27 15:21:53:
胶浓度做大点,多跑一会就可以分开了

嗯 这样我做了,配成了2.5%的胶,但是貌似跑不开,指示剂跑到底了,但是看图上后发现DNA还在上面(还没跑到胶的一半位置),不知道是怎么回事?
只要路是对的,就不怕路远.
9楼2011-12-27 16:52:19
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wanhscn(金币+3): 辛苦! 2011-12-27 21:22:39
wwb95599(金币+4): ★★★很有帮助 2011-12-28 12:28:20
引用回帖:
9楼: Originally posted by wwb95599 at 2011-12-27 16:52:19:
嗯 这样我做了,配成了2.5%的胶,但是貌似跑不开,指示剂跑到底了,但是看图上后发现DNA还在上面(还没跑到胶的一半位置),不知道是怎么回事?

2.5%有点大,1.5~2%的就ok了。
然后就是电泳时间长一些。跑一段时间可以拍照看看,还没分开就继续跑。指示剂跑到哪里无所谓,跑出去也没事,关键是你要的条带跑到哪里。
10楼2011-12-27 17:38:17
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