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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » RAPD产物回收总是三条带,求解决办法
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wwb95599

铜虫 (小有名气)

[求助] RAPD产物回收总是三条带,求解决办法

PCR产物回收，纯化后，1%琼脂糖电泳，可是总有三条带，请问该如何解决？（目的条带大约600bp)
回收中间那条带
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只要路是对的，就不怕路远．
1楼 2011-12-26 15:18:20
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wwb95599

铜虫 (小有名气)
另：上下两条带的大小差异不大（没有100BP)
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只要路是对的，就不怕路远．
2楼2011-12-26 15:35:29
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世外清风

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wwb95599(金币+3): ★有帮助 跑胶时候指示剂都快到底了． 2011-12-27 14:12:28
西瓜(金币+2): 鼓励应助 2011-12-27 17:35:29
楼主这貌似不止3条啊，每次回收结果都这样的话可能不是污染，是不是楼主没等他跑开就切了啊，多跑会再切切看
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

wwb95599
3楼2011-12-27 08:41:43
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世外清风

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

wwb95599(金币+1): ★有帮助 2011-12-27 14:11:01
还有会不会是你最后溶解的水被污染了，你都换换看下
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4楼2011-12-27 08:47:37
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wwb95599

铜虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
楼: Originally posted by 世外清风 at 2011-12-27 08:41:43:
楼主这貌似不止3条啊，每次回收结果都这样的话可能不是污染，是不是楼主没等他跑开就切了啊，多跑会再切切看

这是RAPD扩增出来的带，所以有很多带．我要回收的是中间那条．
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只要路是对的，就不怕路远．
5楼2011-12-27 14:03:55
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wwb95599

铜虫 (小有名气)
wwb95599: 回帖置顶 2011-12-27 14:05:48
引用回帖:
2楼: Originally posted by wwb95599 at 2011-12-26 15:35:29:
另：上下两条带的大小差异不大（没有100BP)

这是回收后的带图，（左边是Marker，右边那两条是回收的）有三条带！
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只要路是对的，就不怕路远．
6楼2011-12-27 14:05:41
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wwb95599

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by 世外清风 at 2011-12-27 08:47:37:
还有会不会是你最后溶解的水被污染了，你都换换看下

这是用试卷盒回收的，溶解的用的是Eluent,PCR后跑完胶观察，是没有污染的．所以应该不是污染的问题．
我最想知道的是，因为那三条带大小相差不大，所以切胶时候可能给上下两条都带了些．怎么样才能使将相差不大的那些带分得更开，这样切起来就方便些．
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只要路是对的，就不怕路远．
7楼2011-12-27 14:10:07
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世外清风

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
西瓜(金币+1): 确实 2011-12-27 17:36:17
wwb95599(金币+2): ★★★很有帮助 2011-12-28 12:29:11
胶浓度做大点，多跑一会就可以分开了
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8楼2011-12-27 15:21:53
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wwb95599

铜虫 (小有名气)
★ ★
wanhscn(金币+2): 鼓励及时反馈！ 2011-12-27 17:28:58
引用回帖:
8楼: Originally posted by 世外清风 at 2011-12-27 15:21:53:
胶浓度做大点，多跑一会就可以分开了

嗯　这样我做了，配成了２.５％的胶，但是貌似跑不开，指示剂跑到底了，但是看图上后发现DNA还在上面（还没跑到胶的一半位置），不知道是怎么回事？
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只要路是对的，就不怕路远．
9楼2011-12-27 16:52:19
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wanhscn(金币+3): 辛苦! 2011-12-27 21:22:39
wwb95599(金币+4): ★★★很有帮助 2011-12-28 12:28:20
引用回帖:
9楼: Originally posted by wwb95599 at 2011-12-27 16:52:19:
嗯　这样我做了，配成了２.５％的胶，但是貌似跑不开，指示剂跑到底了，但是看图上后发现DNA还在上面（还没跑到胶的一半位置），不知道是怎么回事？

2.5%有点大，1.5~2%的就ok了。
然后就是电泳时间长一些。跑一段时间可以拍照看看，还没分开就继续跑。指示剂跑到哪里无所谓，跑出去也没事，关键是你要的条带跑到哪里。
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10楼2011-12-27 17:38:17
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