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jtliuok

金虫 (初入文坛)

[求助] 表达的融合蛋白大小不对~求助

我开始做的是把一个小肽连到一个蛋白的N端,原核表达,购自promega公司的Halotag载体,大小正确。后来改为把小肽连到同一蛋白的C端,质粒测序完全正确,但是表达出来的蛋白明显比对照大了。之前有人说可能是通读了,我又重新设计的引物,加了三个终止密码子,表达出来的蛋白还是那么大,跪求经验~

ps:WB可以抗出来条带~

[ Last edited by jtliuok on 2011-12-23 at 17:09 ]
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坚持就是胜利!
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西瓜(金币+2): Good! 2011-12-24 15:21:15
SDS-PAGE出来的分子量不一定准确的,有时融合后表观分子量是会变大的,在SDS-PAGE中除了跟分子量有关,还跟蛋白的空间结构有关,以前我也做过带his-tag的蛋白在SDS-PAGE中分子量偏大的情况,去做个质谱什么的验证下就是。
2楼2011-12-24 00:26:36
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jtliuok

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
楼: Originally posted by lxj341401 at 2011-12-24 00:26:36:
SDS-PAGE出来的分子量不一定准确的,有时融合后表观分子量是会变大的,在SDS-PAGE中除了跟分子量有关,还跟蛋白的空间结构有关,以前我也做过带his-tag的蛋白在SDS-PAGE中分子量偏大的情况,去做个质谱什么的验证 ...

谢谢您的回复,但是我有对照的,不可能同一块胶对照准,样品不准吧~另外我用的是halotag标签,与相应的珠子共价结合的,以前纯化过好几种蛋白都是用的这种纯化体系,可以说技术很成熟,这次纯化的蛋白条带也很浓,质谱打过两次,两次都分别只有我的目的蛋白的不同的某个小肽段,还望高人指教啊~
坚持就是胜利!
3楼2011-12-26 21:08:55
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