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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 表达的融合蛋白大小不对~求助
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jtliuok

金虫 (初入文坛)

[求助] 表达的融合蛋白大小不对~求助

我开始做的是把一个小肽连到一个蛋白的N端，原核表达，购自promega公司的Halotag载体，大小正确。后来改为把小肽连到同一蛋白的C端，质粒测序完全正确，但是表达出来的蛋白明显比对照大了。之前有人说可能是通读了，我又重新设计的引物，加了三个终止密码子，表达出来的蛋白还是那么大，跪求经验~

ps：WB可以抗出来条带~

[ Last edited by jtliuok on 2011-12-23 at 17:09 ]
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坚持就是胜利！
1楼 2011-12-23 17:03:30
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜(金币+2): Good! 2011-12-24 15:21:15
SDS-PAGE出来的分子量不一定准确的，有时融合后表观分子量是会变大的，在SDS-PAGE中除了跟分子量有关，还跟蛋白的空间结构有关，以前我也做过带his-tag的蛋白在SDS-PAGE中分子量偏大的情况，去做个质谱什么的验证下就是。
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2楼2011-12-24 00:26:36
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jtliuok

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by lxj341401 at 2011-12-24 00:26:36:
SDS-PAGE出来的分子量不一定准确的，有时融合后表观分子量是会变大的，在SDS-PAGE中除了跟分子量有关，还跟蛋白的空间结构有关，以前我也做过带his-tag的蛋白在SDS-PAGE中分子量偏大的情况，去做个质谱什么的验证 ...

谢谢您的回复，但是我有对照的，不可能同一块胶对照准，样品不准吧~另外我用的是halotag标签，与相应的珠子共价结合的，以前纯化过好几种蛋白都是用的这种纯化体系，可以说技术很成熟，这次纯化的蛋白条带也很浓，质谱打过两次，两次都分别只有我的目的蛋白的不同的某个小肽段，还望高人指教啊~
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坚持就是胜利！
3楼2011-12-26 21:08:55
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