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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于Q Sepharose® Fast Flow 阴离子交换柱挂柱问题
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grape114

金虫 (正式写手)

Biosimilars

[求助] 关于Q Sepharose® Fast Flow 阴离子交换柱挂柱问题

我现在也用QFF分离蛋白，用的0.02m的NaOH和甘氨酸做缓冲液，调成PH10.0但是我的蛋白挂不上柱子，我蛋白的PI是8.6左右，想提高缓冲液的PH值，但是怕太高我的蛋白变性，想问下PH值最高能调成多少呢。谢谢
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笑对人生，相信自己。
1楼 2011-12-15 12:24:16
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lhhluo

木虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你蛋白的PI在8.6，其实你把pH调到6或7，用阳离子柱去纯化更合适，如果一定要用Q柱的话，那调节pH低于你的PI让你的蛋白流穿会好点
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2楼2011-12-15 13:03:31
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lihuan0525

金虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
感觉你还是用阳离子交换吧，蛋白这个东西对PH还是要求比较苛刻的
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3楼2011-12-15 15:09:01
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grape114

金虫 (正式写手)

Biosimilars
引用回帖:
2楼: Originally posted by lhhluo at 2011-12-15 13:03:31:
你蛋白的PI在8.6，其实你把pH调到6或7，用阳离子柱去纯化更合适，如果一定要用Q柱的话，那调节pH低于你的PI让你的蛋白流穿会好点

我其实是sp柱下来的，分不开，所以有跑的Q柱，但是挂不上柱子，想看看最大能调成多少好点，能挂上，又不影响我的蛋白
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笑对人生，相信自己。
4楼2011-12-15 16:29:12
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lpw106

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking(金币+4, BioEPI+1): 鼓励积极应助！ 2011-12-15 20:01:57
两种选择：
1、继续用你的QFF，换buffer，如10mM的磷酸，pH7.0，收集穿透峰，同样可以达到除杂的目的，内毒素、DNA、HCP等杂质吸附到Q柱上，而目的蛋白穿透，纯化结束后CIP清洗即可将柱子还原到使用前的状态；
2、用SP阳离子柱，buffer pH7.0，目的蛋白吸附到柱子上，杂质穿透，增加盐浓度洗脱目的蛋白即可。
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5楼2011-12-15 16:30:22
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peakfenghz

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
靶蛋白的PI值那么高，你又顾忌靶蛋白会变性，那么可改用分子筛色谱去分离；如果你一定想用强阴离子QFF柱，建议你听取lpw106回帖的第一个建议，那也不失是一种好的选择。不过按照一般经验，按照你自己确定的条件去做也应该没有问题。挂不上靶蛋白的原因，你可以核查一下你的柱子是否已经真正活化与平衡好了，或者你的样品中存在阴离子干扰。
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Do not impose on others what you do not desire yourself.
6楼2011-12-16 11:05:46
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hinge1001

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

有可能存在阴离子的干扰，或者可以把上样液盐浓度降低一些
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7楼2012-05-31 15:06:57
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豆豆菜虫

金虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by lpw106 at 2011-12-15 16:30:22
两种选择：
1、继续用你的QFF，换buffer，如10mM的磷酸，pH7.0，收集穿透峰，同样可以达到除杂的目的，内毒素、DNA、HCP等杂质吸附到Q柱上，而目的蛋白穿透，纯化结束后CIP清洗即可将柱子还原到使用前的状态；
2、 ...

那要是纯化多糖呢  用怎样的缓冲液？？？
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很多事，不是我想，就能做到的。很多东西，不是我要，就能得到的。
8楼2012-11-03 20:33:02
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2012yanzi

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 豆豆菜虫 at 2012-11-03 20:33:02
那要是纯化多糖呢  用怎样的缓冲液？？？...

可以用磷酸二氢钾-磷酸氢二钠PH6.3缓冲液，用氯化钠做洗脱剂，但是如果分子量太大的的多糖，QFF柱居然不能保留，不知这个问题怎么解决？
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9楼2013-07-14 22:44:03
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