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grape114

金虫 (正式写手)

Biosimilars

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[求助] 关于Q Sepharose® Fast Flow 阴离子交换柱挂柱问题

我现在也用QFF分离蛋白，用的0.02m的NaOH和甘氨酸做缓冲液，调成PH10.0但是我的蛋白挂不上柱子，我蛋白的PI是8.6左右，想提高缓冲液的PH值，但是怕太高我的蛋白变性，想问下PH值最高能调成多少呢。谢谢

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笑对人生，相信自己。

1楼2011-12-15 12:24:16

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lpw106

银虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
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amisking(金币+4, BioEPI+1): 鼓励积极应助！ 2011-12-15 20:01:57

两种选择：
1、继续用你的QFF，换buffer，如10mM的磷酸，pH7.0，收集穿透峰，同样可以达到除杂的目的，内毒素、DNA、HCP等杂质吸附到Q柱上，而目的蛋白穿透，纯化结束后CIP清洗即可将柱子还原到使用前的状态；
2、用SP阳离子柱，buffer pH7.0，目的蛋白吸附到柱子上，杂质穿透，增加盐浓度洗脱目的蛋白即可。