24小时热门版块排行榜    

查看: 4192  |  回复: 8
本帖产生 1 个 BioEPI ,点击这里进行查看

grape114

金虫 (正式写手)

Biosimilars

[求助] 关于Q Sepharose® Fast Flow 阴离子交换柱挂柱问题

我现在也用QFF分离蛋白,用的0.02m的NaOH和甘氨酸做缓冲液,调成PH10.0但是我的蛋白挂不上柱子,我蛋白的PI是8.6左右,想提高缓冲液的PH值,但是怕太高我的蛋白变性,想问下PH值最高能调成多少呢。谢谢
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

笑对人生,相信自己。
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lhhluo

木虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你蛋白的PI在8.6,其实你把pH调到6或7,用阳离子柱去纯化更合适,如果一定要用Q柱的话,那调节pH低于你的PI让你的蛋白流穿会好点
2楼2011-12-15 13:03:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lihuan0525

金虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
感觉你还是用阳离子交换吧,蛋白这个东西对PH还是要求比较苛刻的
3楼2011-12-15 15:09:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

grape114

金虫 (正式写手)

Biosimilars

引用回帖:
2楼: Originally posted by lhhluo at 2011-12-15 13:03:31:
你蛋白的PI在8.6,其实你把pH调到6或7,用阳离子柱去纯化更合适,如果一定要用Q柱的话,那调节pH低于你的PI让你的蛋白流穿会好点

我其实是sp柱下来的,分不开,所以有跑的Q柱,但是挂不上柱子,想看看最大能调成多少好点,能挂上,又不影响我的蛋白
笑对人生,相信自己。
4楼2011-12-15 16:29:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lpw106

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
amisking(金币+4, BioEPI+1): 鼓励积极应助! 2011-12-15 20:01:57
两种选择:
1、继续用你的QFF,换buffer,如10mM的磷酸,pH7.0,收集穿透峰,同样可以达到除杂的目的,内毒素、DNA、HCP等杂质吸附到Q柱上,而目的蛋白穿透,纯化结束后CIP清洗即可将柱子还原到使用前的状态;
2、用SP阳离子柱,buffer pH7.0,目的蛋白吸附到柱子上,杂质穿透,增加盐浓度洗脱目的蛋白即可。
5楼2011-12-15 16:30:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

peakfenghz

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
靶蛋白的PI值那么高,你又顾忌靶蛋白会变性,那么可改用分子筛色谱去分离;如果你一定想用强阴离子QFF柱,建议你听取lpw106回帖的第一个建议,那也不失是一种好的选择。不过按照一般经验,按照你自己确定的条件去做也应该没有问题。挂不上靶蛋白的原因,你可以核查一下你的柱子是否已经真正活化与平衡好了,或者你的样品中存在阴离子干扰。
Do not impose on others what you do not desire yourself.
6楼2011-12-16 11:05:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hinge1001

银虫 (小有名气)


【答案】应助回帖

有可能存在阴离子的干扰,或者可以把上样液盐浓度降低一些
7楼2012-05-31 15:06:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

豆豆菜虫

金虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by lpw106 at 2011-12-15 16:30:22
两种选择:
1、继续用你的QFF,换buffer,如10mM的磷酸,pH7.0,收集穿透峰,同样可以达到除杂的目的,内毒素、DNA、HCP等杂质吸附到Q柱上,而目的蛋白穿透,纯化结束后CIP清洗即可将柱子还原到使用前的状态;
2、 ...

那要是纯化多糖呢  用怎样的缓冲液???
很多事,不是我想,就能做到的。很多东西,不是我要,就能得到的。
8楼2012-11-03 20:33:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

2012yanzi

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 豆豆菜虫 at 2012-11-03 20:33:02
那要是纯化多糖呢  用怎样的缓冲液???...

可以用磷酸二氢钾-磷酸氢二钠PH6.3缓冲液,用氯化钠做洗脱剂,但是如果分子量太大的的多糖,QFF柱居然不能保留,不知这个问题怎么解决?
9楼2013-07-14 22:44:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 grape114 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 今天系统多次维护,明天很可能放榜! +5 zju2000 2026-08-16 5/250 2026-08-16 23:23 by Haru815
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +32 医学老男孩 2026-08-13 74/3700 2026-08-16 21:05 by 医学老男孩
[论文投稿] 岩土工程学报什么时候才能终审完呐 25+3 yeager111 2026-08-10 4/200 2026-08-16 20:42 by tfang
[基金申请] 2027广东省杰青 +3 奶牛小黑 2026-08-15 6/300 2026-08-16 20:07 by 奶牛小黑
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +9 Ldrop2023 2026-08-13 9/450 2026-08-16 13:24 by wukun_007
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +11 家与远方 2026-08-10 16/800 2026-08-16 10:28 by ray43
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +6 wangze12014 2026-08-14 7/350 2026-08-15 20:12 by gltch
[基金申请] filecode +8 cratir 2026-08-14 12/600 2026-08-15 18:08 by zyfgau
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +10 majunge000 2026-08-10 13/650 2026-08-15 12:26 by hanpeng972
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] filecode +15 documentary 2026-08-10 17/850 2026-08-14 10:08 by kissu88
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
信息提示
请填处理意见