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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于Q Sepharose® Fast Flow 阴离子交换柱挂柱问题
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grape114

金虫 (正式写手)

Biosimilars

[求助] 关于Q Sepharose® Fast Flow 阴离子交换柱挂柱问题

我现在也用QFF分离蛋白，用的0.02m的NaOH和甘氨酸做缓冲液，调成PH10.0但是我的蛋白挂不上柱子，我蛋白的PI是8.6左右，想提高缓冲液的PH值，但是怕太高我的蛋白变性，想问下PH值最高能调成多少呢。谢谢
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1楼 2011-12-15 12:24:16
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lihuan0525

金虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
感觉你还是用阳离子交换吧，蛋白这个东西对PH还是要求比较苛刻的
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3楼2011-12-15 15:09:01
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lhhluo

木虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你蛋白的PI在8.6，其实你把pH调到6或7，用阳离子柱去纯化更合适，如果一定要用Q柱的话，那调节pH低于你的PI让你的蛋白流穿会好点
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2楼2011-12-15 13:03:31
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grape114

金虫 (正式写手)

Biosimilars
引用回帖:
2楼: Originally posted by lhhluo at 2011-12-15 13:03:31:
你蛋白的PI在8.6，其实你把pH调到6或7，用阳离子柱去纯化更合适，如果一定要用Q柱的话，那调节pH低于你的PI让你的蛋白流穿会好点

我其实是sp柱下来的，分不开，所以有跑的Q柱，但是挂不上柱子，想看看最大能调成多少好点，能挂上，又不影响我的蛋白
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笑对人生，相信自己。
4楼2011-12-15 16:29:12
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lpw106

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking(金币+4, BioEPI+1): 鼓励积极应助！ 2011-12-15 20:01:57
两种选择：
1、继续用你的QFF，换buffer，如10mM的磷酸，pH7.0，收集穿透峰，同样可以达到除杂的目的，内毒素、DNA、HCP等杂质吸附到Q柱上，而目的蛋白穿透，纯化结束后CIP清洗即可将柱子还原到使用前的状态；
2、用SP阳离子柱，buffer pH7.0，目的蛋白吸附到柱子上，杂质穿透，增加盐浓度洗脱目的蛋白即可。
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5楼2011-12-15 16:30:22
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