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grape114

金虫 (正式写手)

Biosimilars

应助: 4 (幼儿园)
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散金: 85
红花: 1
帖子: 387
在线: 150.1小时
虫号: 777563
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性别: GG
专业: 生物技术药物

[求助] 关于Q Sepharose® Fast Flow 阴离子交换柱挂柱问题

我现在也用QFF分离蛋白，用的0.02m的NaOH和甘氨酸做缓冲液，调成PH10.0但是我的蛋白挂不上柱子，我蛋白的PI是8.6左右，想提高缓冲液的PH值，但是怕太高我的蛋白变性，想问下PH值最高能调成多少呢。谢谢

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笑对人生，相信自己。

1楼2011-12-15 12:24:16

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peakfenghz

铜虫 (初入文坛)

应助: 3 (幼儿园)
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专业: 生物化学

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

靶蛋白的PI值那么高，你又顾忌靶蛋白会变性，那么可改用分子筛色谱去分离；如果你一定想用强阴离子QFF柱，建议你听取lpw106回帖的第一个建议，那也不失是一种好的选择。不过按照一般经验，按照你自己确定的条件去做也应该没有问题。挂不上靶蛋白的原因，你可以核查一下你的柱子是否已经真正活化与平衡好了，或者你的样品中存在阴离子干扰。