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sunmoods

金虫 (小有名气)

应助: 2 (幼儿园)
金币: 709.1
散金: 7
帖子: 70
在线: 102.7小时
虫号: 544679
注册: 2008-04-13
专业: 环境微生物学

[求助] 求分析PCR电泳图

细菌16SrDNA  V3区  带GC夹子PCR
94          50S
55          30S
72             30S
25循环
条带拖尾，不知道什么原因，怎么优化，求助

循环30次的时候空白条带很明显

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1楼 2011-12-06 09:25:21

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syn1985

木虫 (正式写手)

MolEPI: 3
应助: 15 (小学生)
金币: 2765.5
散金: 60
红花: 3
帖子: 578
在线: 273.2小时
虫号: 463029
注册: 2007-11-19
性别: MM
专业: 病原细菌与放线菌生物学

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, MolEPI+1): Good！ 2011-12-08 18:44:42

你条带拖尾的可能性很多：
1：模板弄度大了，需调整
2：退火温度太低，提高退火温度
3：GC含量高可在PCR反应体系中选用GC buffer 同时加用5%浓度的DMSO，DMSO可帮助解螺旋
4：预变性时间稍长不会影响PCR结果

赞一下(1人)

14楼2011-12-07 20:59:51

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