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cheauyn铁杆木虫 (正式写手)
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[求助]
发酵罐染菌问题
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现在在做一项目，一上罐子就染菌，摇瓶一点问题都没有。5L，7L，30L都试过，每个罐子都染。由于培养基灭菌不透彻，里面最有可能的就是5%的黄豆饼粉(其他的都单独试过，没有问题)，想请各位大侠帮帮忙，这种问题怎么解决啊？~~~急~~~急 另， 1） 已试过将黄豆饼粉单独在灭菌前煮沸1-2h，发酵后期仍有染菌现象； 2）黄豆饼粉水解后过滤，可解决，但是菌种生长受到限制。 不知各位是否有更好的办法解决？ |
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thiophene9859
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【答案】应助回帖
★
cheauyn(金币+2): 谢谢！ 2011-11-30 10:17:58
zhang8826857(金币+1): 写了这么多，奖励热心虫子 2011-11-30 11:15:47
cheauyn(金币+2): 谢谢！ 2011-11-30 10:17:58
zhang8826857(金币+1): 写了这么多，奖励热心虫子 2011-11-30 11:15:47
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一般来说黄豆粉不存在灭菌不透的问题，如果怀疑黄豆粉，摇瓶实验有没有添加黄豆粉？摇瓶实验要是添加了黄豆粉没有染，就说明不是黄豆粉的问题。检验摇瓶种子有没有染菌显微镜检测在杂菌浓度低的时候不可靠，建议采用平板涂布。 如果种子没有问题，罐体密封性没有问题。做个设备验证，在发酵罐中随便加点葡萄糖、蛋白胨，灭菌后不接种，通气，如果还染菌就说明是空气系统的问题。如果空气系统有问题，空压机是否定期排水？油水分离器是否良好工作，都没有问题尝试更换空气过滤器，小罐过滤器便宜，几十块一个。 |
7楼2011-11-30 09:10:16
【答案】应助回帖
★
cheauyn(金币+2): 很有道理，罐子应该没有问题。过滤器，滤芯全都换过新的，而且之前也做过其他的菌种，没有问题。感觉问题可能出在黄豆饼粉上。 2011-12-01 08:36:44
zhang8826857(金币+1): 鼓励热心虫子 2011-12-01 09:23:23
cheauyn(金币+2): 很有道理，罐子应该没有问题。过滤器，滤芯全都换过新的，而且之前也做过其他的菌种，没有问题。感觉问题可能出在黄豆饼粉上。 2011-12-01 08:36:44
zhang8826857(金币+1): 鼓励热心虫子 2011-12-01 09:23:23
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一般来说你这种情况，发酵前期、中期都有污染。 前期污染：①有可能空气系统有问题、②设备有问题（发酵罐或者管道存在死角，灭菌灭不到)、③培养基灭菌不彻底。 中期污染：最大可能性就是黄豆粉存在结块，黄豆粉小疙瘩灭不透。 建议你不要盲目上罐，彻底清查出染菌原因，你已经做过摇瓶验证种子应该没问题。建议你仔细检查下发酵设备，发酵罐看看有没有死角，空气过滤系统是否完善，过滤器、滤芯都要检查，培养基当中的黄豆粉，在上罐前用水浸泡，浸泡个1到2小时，在搅拌，做到黄豆粉不结块。这些都弄好，做1—2次空白培养，12h、24、36看看效果，是否染菌。空白培养做到不染菌在上菌种培养，在上罐中做下摇瓶同步培养验证。 个人已经仅供参考 |
9楼2011-11-30 12:44:37
donng
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