| 查看: 3779 | 回复: 19 | ||||
| 本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看 | ||||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||||
syn1985木虫 (正式写手)
|
[求助]
做过overlap PCR的虫子过来看看
|
|||
|
我准备用in-frame deletion 做基因敲除 里面有一步是需要用overlap PCR扩增片段用以构建敲除质粒 我看PROTOCOL FOR IN-FRAME DELETION MUTAGENESIS (A. Beliaev, S.B. Reed, D. Stanek, D. Saffarini, M. Romine)里面介绍的时候说overlap PCR的引物设计时需要加一个tag，就是扩增的两个片段有一块是互补的，上面指写了要小于21bp，那这段序列应该是自己在设计引物加上去的，可这段序列是自己随便编一段，还是有设计依据的啊？困惑中......  PS 我不需要在这段里面加入酶切位点 谢谢各位虫子 小女子在此谢过 |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 核酸生物学实验经验 | 实验技巧以及英语学习相关 |
» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有151人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- overlap PCR之问题
已经有16人回复
- overlap PCR做不出来呐。。。。
已经有23人回复
- 请高手看看我的PCR图片
已经有28人回复
- 做过用同源重组进行基因敲出的朋友请进，PCR做不出来！！
已经有16人回复
- A noob intersted in SCI searching for help(about overlap PCR)
已经有4人回复
- 帮我看看这个溶解qPCR曲线
已经有6人回复
- 看看我的DNA提取及PCR结果有什么问题
已经有11人回复
- Genome Walking 上图啦，大伙帮忙看看怎么提高PCR质量
已经有4人回复
- 【求助/交流】做过RT-PCR的请进
已经有12人回复
- 【求助/交流】PCR--小弟上图了，帮我看看图
已经有33人回复
- 【求助】做过联萘酚衍生物的虫子进来看看！！
已经有20人回复
- 【分享】看看我做的这个新型PCR增强剂效果怎么样
已经有24人回复
- 【求助/交流】做过大引物全质粒PCR的进来看
已经有29人回复
- 谁做过双链RNA的RT-PCR
已经有4人回复
syn1985
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 3
- 应助: 15 (小学生)
- 金币: 2765.5
- 散金: 60
- 红花: 3
- 帖子: 578
- 在线: 273.2小时
- 虫号: 463029
- 注册: 2007-11-19
- 性别: MM
- 专业: 病原细菌与放线菌生物学
送鲜花一朵 
5楼2011-11-21 21:39:51
mytkkxx
木虫 (小有名气)
- MolEPI: 1
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1824.4
- 帖子: 253
- 在线: 122.3小时
- 虫号: 1244300
- 注册: 2011-03-25
- 专业: 病原真菌学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
amisking(金币+2): 鼓励发帖交流。 2011-11-21 18:35:40
syn1985(金币+20): 5 2011-11-21 21:37:54
wanhscn(金币+5): Good！ 2011-11-21 23:09:13
西瓜(MolEPI+1): Good！补上EPI！ 2011-11-22 18:01:43
amisking(金币+2): 鼓励发帖交流。 2011-11-21 18:35:40
syn1985(金币+20): 5 2011-11-21 21:37:54
wanhscn(金币+5): Good！ 2011-11-21 23:09:13
西瓜(MolEPI+1): Good！补上EPI！ 2011-11-22 18:01:43
| 前不久做了下，这个不是随便加的，如果要将两个片段融合起来，那么在设计前面片段的反向引物的时候在5'端加上后面片段开始的碱基序列，大概20nt就可以了，同理在后面片段的正向引物5'端加上前面片段20nt左右。也就是说中间两个引物是反向互补的，40nt左右，也就是重叠PCR中重叠的部分 |
2楼2011-11-21 18:30:38
syn1985
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 3
- 应助: 15 (小学生)
- 金币: 2765.5
- 散金: 60
- 红花: 3
- 帖子: 578
- 在线: 273.2小时
- 虫号: 463029
- 注册: 2007-11-19
- 性别: MM
- 专业: 病原细菌与放线菌生物学
3楼2011-11-21 18:33:14
blackrose8089
铁杆木虫 (职业作家)
- MolEPI: 16
- 应助: 100 (初中生)
- 贵宾: 0.11
- 金币: 10638.6
- 散金: 155
- 红花: 30
- 沙发: 6
- 帖子: 3702
- 在线: 790.1小时
- 虫号: 614948
- 注册: 2008-09-28
- 专业: 植物学研究的新技术、新方
4楼2011-11-21 19:03:25
