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catmihzh木虫 (小有名气)
虫虫特攻队队长
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[求助]
提基因组的问题
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用酚氯仿法提一个曲霉基因组，最后用TE溶沉淀时感觉很稠，并且有点淡黄，用未稀释的和稀释30倍的分别跑电泳，结果未稀释的是长长的亮带，稀释的有一条带，但是大小比基因组的要小，如图，前孔是未稀释的，后面一个是稀释的。已经提了三次了，都差不多这样，求解释。。。 |
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【答案】应助回帖
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wanhscn(金币+3): 有道理! 2011-11-19 18:41:40
wanhscn(金币+3): 有道理! 2011-11-19 18:41:40
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稀释的那处应该比23k也没小多少吧？ 下次点近一点Marker,建议用0.6%的胶。4-5V/cm，电泳1小时。 从你电泳图来看，有两个问题， 1.产量太高了。 2.有RNA污染。 建议： 1.不用这么多样品量提取，或者最后溶解后再稀释。样品量有时并不是用得越多越好。特别如果样品本身含有丰富的核酸酶时，如果用很多的样品导致裂解液不足以抑制内源性的核酸酶，那得不偿失。适量！ 2.从你稀释的样品来看，23k位置有一条带，是DNA条带。下面的是还没有降解完全的RNA。如不是你所用样品量过多，那就是此霉RNA含量丰富，再要不就是你的RNase活性不足或温育时间不够。 |
5楼2011-11-19 14:15:39
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2楼2011-11-18 23:26:32
catmihzh
木虫 (小有名气)
虫虫特攻队队长
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 2626.3
- 红花: 1
- 帖子: 67
- 在线: 11.1小时
- 虫号: 1261648
- 注册: 2011-04-11
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
3楼2011-11-19 09:44:50
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4楼2011-11-19 11:37:56
