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jia1012428

铜虫 (小有名气)

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[交流] 【求助/交流】请教一个提基因组的问题已有3人参与

请问大家，我有一个混菌体系，想做末端限制性酶切片段长度多态性分析，需要提混菌的总基因组，我看试剂盒上的说明说革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌提取方法不一样，请教分子高手该怎么做，多谢！

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【求助/交流】DNA跑胶2ul有目的带很清晰，但是胶回收时，上样量为20ul时跑电泳却降解� 已经有17人回复

1楼2010-09-15 10:14:43

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sfxt001

木虫 (小有名气)

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1949stone(金币+2):谢谢交流 2010-09-15 19:34:16

这个我在前面回别人的帖子上面提到过，阳性菌分子操作的一个重要的需要解决的问题就是细胞裂解的是否充分，革兰氏阳性菌的细胞壁非常结实，对于阴性菌好使的SDS碱性裂解液直接用来裂解阳性菌细胞是不好使的，细胞裂不掉，你想抽到基因组，当然是搞不定的。比如说处理金黄色葡萄球菌，在用SDS碱性裂解液之前，就得先用溶葡萄球菌酶处理才行。问题是你用的是混合菌，你的菌群里有哪些革兰氏阳性菌你是不知道的，所以可能用物理方法比如超声破碎先预处理比较好。