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lmzxcom1

金虫 (著名写手)

[求助] 蛋白质的糖基化测定

手头有一个酶在毕赤酵母GS115/pPIC9K中表达,表达后的酶根据分析,含有很多天冬酰胺等容易糖基化的位点,现在想测定是否真正糖基化了,如果是,能不能测定糖基化位点呢
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啊Q精神

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

糖苷酶消化后跑电泳,或者HPLC
糖基化肯定是有的,糖基化程度不好说。比真核细胞的厉害点,比酿酒酵母的轻很多。
2楼2011-11-17 17:25:43
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fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主

能 用质谱能找到糖基化位点的~ 最近听的基因组学方面的讲座比较作 都提到质谱了
几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
3楼2011-11-17 20:32:37
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lmzxcom1

金虫 (著名写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by fungixx at 2011-11-17 20:32:37:
能 用质谱能找到糖基化位点的~ 最近听的基因组学方面的讲座比较作 都提到质谱了

MS是不要要求样品的纯度很高啊
4楼2011-11-18 08:28:16
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0624410024

金虫 (正式写手)

Begging for knowledge

【答案】应助回帖

lmzxcom1(金币+10): 2011-11-19 11:31:31
楼主,这个希望能稍微地帮助你下!
每天坚持多一点,以后困难少一点!
5楼2011-11-18 14:00:13
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rudy668

金虫 (小有名气)

引用回帖:
64217楼: Originally posted by 0624410024 at 2011-11-18 14:00:13
楼主,这个希望能稍微地帮助你下!

谢谢兄台的分享文献,受用了·
每日一小步,人生一大步
6楼2012-06-08 17:02:40
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乐乐3952

铁杆木虫 (正式写手)

最近刚表达了个酶,跑SDS PAGE也发现问题了,条带很大,硫酸铵沉淀不下来,感觉是因为毕赤酵母的糖基化原因,不知楼主怎么处理的?
一花一世界、一叶一菩提
7楼2013-04-17 21:53:24
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程醉寒风

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 0624410024 at 2011-11-18 14:00:13
楼主,这个希望能稍微地帮助你下!

这个怎么看啊,谢谢
8楼2013-12-12 19:59:23
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21jianyu1314

金虫 (小有名气)

可以测定,一下只是我的想法希望可以对您有帮助,把表达的糖蛋白纯化后用相应的蛋白酶酶切,如Glu-c、Trypsin、Lys-C等,找一个适合的,然后将酶解的产物加热100度,冷却室温后加PNGase F酶,过夜孵育或孵育24小时,将切糖链的与没切的样品分别用HPLC分离找到差异组分做MALDI。具体的可以找文献参考。
没有可以完全笃定的未来,只有悉心经营的现在
9楼2014-11-27 09:19:33
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2009227004

金虫 (正式写手)

直接做个含糖量测定(苯酚硫酸法)就行了,含糖量的多少来确定糖基化程度。其次还可以确定是N-glycan还是O-glycan,再采用PNGase F 或O-糖苷酶进行酶切后进行质谱分析!
当别人都在假装正经的时候,我就假装不正经。
10楼2015-01-20 10:43:28
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