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belina张

新虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白质的存在会对多糖含量的测定产生影响吗

蛋白质的存在会对多糖含量的测定有影响吗
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1楼2013-10-09 09:18:15
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

沙伯略

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感谢参与，应助指数 +1
如果是用苯酚法测定多糖含量的话，基本不受蛋白质的影响。因为其测定原理是：多糖在浓硫酸作用下，脱水生成的糠醛或羟甲基糠醛能与苯酚缩合成一种橙红色化合物，在10－100mg/ml范围内其颜色深浅与糖的含量成正比，且在485nm波长下有最大吸收，因而可用比色法在此波长下测定。
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3楼2013-10-09 12:26:02
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mingge

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
belina张: 金币+5, ★有帮助 2013-10-10 09:04:48
看你用什么方法检测了。最好是先前处理一下，比如使用SPE或者沉淀过滤等。
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Q1454596160
2楼2013-10-09 11:29:36
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沙伯略

捐助贵宾 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by belina张 at 2013-10-10 09:12:09
谢谢了。我使用的是间羟基联苯法测多糖中糖醛酸的含量，不知这个方法受蛋白质的影响大吗？如果使用硅胶薄层板来鉴别糖醛酸的种类时，蛋白质会有影响吗？...

蛋白质的存在会有一定的影响，参见《对羟基联苯法定量测定发酵液中的乳酸》。。。
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5楼2013-10-10 20:52:00
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belina张

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 沙伯略 at 2013-10-09 12:26:02
如果是用苯酚法测定多糖含量的话，基本不受蛋白质的影响。因为其测定原理是：多糖在浓硫酸作用下，脱水生成的糠醛或羟甲基糠醛能与苯酚缩合成一种橙红色化合物，在10－100mg/ml范围内其颜色深浅与糖的含量成正比，且 ...

谢谢了。我使用的是间羟基联苯法测多糖中糖醛酸的含量，不知这个方法受蛋白质的影响大吗？如果使用硅胶薄层板来鉴别糖醛酸的种类时，蛋白质会有影响吗？
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4楼2013-10-10 09:12:09
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志存高远888

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 沙伯略 at 2013-10-09 12:26:02
如果是用苯酚法测定多糖含量的话，基本不受蛋白质的影响。因为其测定原理是：多糖在浓硫酸作用下，脱水生成的糠醛或羟甲基糠醛能与苯酚缩合成一种橙红色化合物，在10－100mg/ml范围内其颜色深浅与糖的含量成正比，且 ...

您好，想问问您，我测定多糖含量时，是先热水浸提，然后离心取上清液，测定体积，苯酚硫酸法测定的多糖含量，得到得率在9%左右，但是我要是醇沉后，沉淀水溶再测定的话，得率就是1%左右，想问问那种方法靠谱啊？为什么差别这么大啊？
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6楼2014-08-18 20:51:46
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沙伯略

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6楼: Originally posted by 志存高远888 at 2014-08-18 20:51:46
您好，想问问您，我测定多糖含量时，是先热水浸提，然后离心取上清液，测定体积，苯酚硫酸法测定的多糖含量，得到得率在9%左右，但是我要是醇沉后，沉淀水溶再测定的话，得率就是1%左右，想问问那种方法靠谱啊？为 ...

醇沉最终醇浓度多大呢？测含量的话就别用醇沉了吧，否则少部分水也会溶解相当一部分多糖。
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7楼2014-08-18 23:18:34
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志存高远888

银虫 (小有名气)
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7楼: Originally posted by 沙伯略 at 2014-08-18 23:18:34
醇沉最终醇浓度多大呢？测含量的话就别用醇沉了吧，否则少部分水也会溶解相当一部分多糖。...

最终浓度不一定，我直接加的上清液的3倍体积的95%乙醇，如果不醇沉，测得含量特别不准，单因素曲线忽上忽下，现在还没有找到原因。望给予指导，谢谢啦~
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8楼2014-08-19 19:34:04
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吴月芽2009

银虫 (小有名气)
首先，1、提取物直接测多糖，吸光值偏高。这个误差不大。
2、醇沉粗多糖约占水提物多糖一半。
3、看你的操作，主要多糖未完全醇沉。
改进的操作：上清液要浓缩，测固形物6%左右，加乙醇后，整个溶液的乙醇浓度要在80%以上。你的操作，醇浓度偏低，无法完全析出，若上清液体积不大不便浓缩，可以直接加热蒸发部分水分，或者加入1:5乙醇。
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9楼2014-08-26 10:52:47
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ilovesf

新虫 (初入文坛)
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6楼: Originally posted by 志存高远888 at 2014-08-18 20:51:46
您好，想问问您，我测定多糖含量时，是先热水浸提，然后离心取上清液，测定体积，苯酚硫酸法测定的多糖含量，得到得率在9%左右，但是我要是醇沉后，沉淀水溶再测定的话，得率就是1%左右，想问问那种方法靠谱啊？为 ...

您好！问一下你醇沉后的多糖水溶好溶解吗？醇沉后的多糖你有没有经过干燥？为什么我将粗多糖完全干燥了之后想测含量的时候很难溶了呢？
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静以修身
10楼2015-05-08 23:27:23
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