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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 微藻 胞内多糖含量测定 培养基外加碳源葡萄糖含量测定
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hyyandcpp

银虫 (小有名气)

[求助] 微藻 胞内多糖含量测定 培养基外加碳源葡萄糖含量测定

各位大侠们，我现在实验通过外加碳源葡萄糖提高微藻生物量以及胞内多糖含量，目前用蒽酮比色法测定微藻胞内总糖含量，由于优化条件工作量大，所以没有采用乙醇沉淀之后，测定胞内总糖含量；
问题：1.能否用蒽酮法测定培养基中剩余葡萄糖含量，如果能，是否误差比较大，因为微藻有胞外多糖？
      2.如果不能，能否用DNS法，但是查资料DNS既可测总糖又可测定还原糖含量，那是否把胞内多糖含量也用这个方法呢，总不能一篇文章出现两个测多糖的方法吧？
大家做过的，给个建议吧，灰常感谢
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1楼 2012-07-22 17:54:02
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zhna123

铁虫 (初入文坛)
应该可以吧 用硫酸水解，在dns测总糖。我原来是胞外多糖，方便很多。直接离心乙醇沉淀烘干测重量。
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hyyandcpp
2楼2012-07-22 22:53:45
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swnz

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
hyyandcpp: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-07-23 09:52:37
区别胞外多糖与碳源葡萄糖的方法很简单。多糖一般可以用醇、酸、盐等沉淀，而葡萄糖不会。用离心法分开后分别测糖就可以避免互相干扰了。DNS法测的是还原性糖，而蒽酮法测的是各种糖的总量，范围不同的。所以最好不要用蒽酮法测培养基中的葡萄糖，因为培养基中还可能有其它糖类，可以用DNS法。
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hyyandcpp
跟着感觉走
3楼2012-07-23 07:21:04
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hyyandcpp

银虫 (小有名气)
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引用回帖:
3楼: Originally posted by swnz at 2012-07-23 07:21:04
区别胞外多糖与碳源葡萄糖的方法很简单。多糖一般可以用醇、酸、盐等沉淀，而葡萄糖不会。用离心法分开后分别测糖就可以避免互相干扰了。DNS法测的是还原性糖，而蒽酮法测的是各种糖的总量，范围不同的。所以最好不 ...

您的意思是，微藻培养液离心，弃藻泥沉淀，然后用醇等沉淀上清液多糖，再离心，然后分别测胞外多糖和葡萄糖的含量吗，需要浓缩吗，如果不的话，可能会浪费不少醇吧？
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4楼2012-07-23 09:51:13
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hyyandcpp

银虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhna123 at 2012-07-22 22:53:45
应该可以吧 用硫酸水解，在dns测总糖。我原来是胞外多糖，方便很多。直接离心乙醇沉淀烘干测重量。

请问您当初测胞外多糖的时候浓缩了没，如果没浓缩，可能会浪费不少醇吧？
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5楼2012-07-23 09:52:13
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hyyandcpp

银虫 (小有名气)
刚想到一个问题，胞外多糖不是还原糖，那我就可以直接拿上清液用DNS法测葡萄糖含量了呗，互不影响的。
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6楼2012-07-23 10:01:24
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zhna123

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by hyyandcpp at 2012-07-23 09:52:13
请问您当初测胞外多糖的时候浓缩了没，如果没浓缩，可能会浪费不少醇吧？...

一开始用的95乙醇，发现用量挺大，直接买的工业酒精，也是95的，很便宜，回收之后用来点酒精灯。
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7楼2012-07-23 10:20:17
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swnz

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
hyyandcpp: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-07-27 10:58:24
引用回帖:
4楼: Originally posted by hyyandcpp at 2012-07-23 09:51:13
您的意思是，微藻培养液离心，弃藻泥沉淀，然后用醇等沉淀上清液多糖，再离心，然后分别测胞外多糖和葡萄糖的含量吗，需要浓缩吗，如果不的话，可能会浪费不少醇吧？...

没懂意思。你的多糖含量很低吗？即使这样，只需要处理一点微藻培养液，得到多糖沉淀，水解就行了。因为蒽酮法很灵敏的，显色时只需保证20ppm以上。
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跟着感觉走
8楼2012-07-23 21:57:47
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豆豆菜虫

金虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by hyyandcpp at 2012-07-23 09:52:13
请问您当初测胞外多糖的时候浓缩了没，如果没浓缩，可能会浪费不少醇吧？...

测胞外多糖 你得先灭菌吧？？？然后再离心吧 然后在浓缩上清液 在浓缩后的上清液中加乙醇醇沉~~我不知道我说的对不对 我的个人看法
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很多事，不是我想，就能做到的。很多东西，不是我要，就能得到的。
9楼2012-07-24 17:18:45
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