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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白质的糖基化测定
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lmzxcom1

金虫 (著名写手)

[求助] 蛋白质的糖基化测定

手头有一个酶在毕赤酵母GS115/pPIC9K中表达，表达后的酶根据分析，含有很多天冬酰胺等容易糖基化的位点，现在想测定是否真正糖基化了，如果是，能不能测定糖基化位点呢
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1楼 2011-11-17 17:03:25
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啊Q精神

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

糖苷酶消化后跑电泳，或者HPLC
糖基化肯定是有的，糖基化程度不好说。比真核细胞的厉害点，比酿酒酵母的轻很多。
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2楼2011-11-17 17:25:43
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fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主
能 用质谱能找到糖基化位点的~ 最近听的基因组学方面的讲座比较作 都提到质谱了
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几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
3楼2011-11-17 20:32:37
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lmzxcom1

金虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by fungixx at 2011-11-17 20:32:37:
能 用质谱能找到糖基化位点的~ 最近听的基因组学方面的讲座比较作 都提到质谱了

MS是不要要求样品的纯度很高啊
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4楼2011-11-18 08:28:16
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0624410024

金虫 (正式写手)

Begging for knowledge

【答案】应助回帖

lmzxcom1(金币+10): 2011-11-19 11:31:31
楼主，这个希望能稍微地帮助你下！
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每天坚持多一点，以后困难少一点！
5楼2011-11-18 14:00:13
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rudy668

金虫 (小有名气)
引用回帖:
64217楼: Originally posted by 0624410024 at 2011-11-18 14:00:13
楼主，这个希望能稍微地帮助你下！

谢谢兄台的分享文献，受用了·
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每日一小步，人生一大步
6楼2012-06-08 17:02:40
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乐乐3952

铁杆木虫 (正式写手)
最近刚表达了个酶，跑SDS PAGE也发现问题了，条带很大，硫酸铵沉淀不下来，感觉是因为毕赤酵母的糖基化原因，不知楼主怎么处理的？
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一花一世界、一叶一菩提
7楼2013-04-17 21:53:24
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程醉寒风

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 0624410024 at 2011-11-18 14:00:13
楼主，这个希望能稍微地帮助你下！

这个怎么看啊，谢谢
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8楼2013-12-12 19:59:23
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21jianyu1314

金虫 (小有名气)
可以测定，一下只是我的想法希望可以对您有帮助，把表达的糖蛋白纯化后用相应的蛋白酶酶切，如Glu-c、Trypsin、Lys-C等，找一个适合的，然后将酶解的产物加热100度，冷却室温后加PNGase F酶，过夜孵育或孵育24小时，将切糖链的与没切的样品分别用HPLC分离找到差异组分做MALDI。具体的可以找文献参考。
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没有可以完全笃定的未来，只有悉心经营的现在
9楼2014-11-27 09:19:33
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2009227004

金虫 (正式写手)
直接做个含糖量测定（苯酚硫酸法）就行了，含糖量的多少来确定糖基化程度。其次还可以确定是N-glycan还是O-glycan，再采用PNGase F 或O-糖苷酶进行酶切后进行质谱分析！
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当别人都在假装正经的时候，我就假装不正经。
10楼2015-01-20 10:43:28
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