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蛋白质的糖基化测定
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lmzxcom1
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蛋白质的糖基化测定
手头有一个酶在毕赤酵母GS115/pPIC9K中表达,表达后的酶根据分析,含有很多天冬酰胺等容易糖基化的位点,现在想测定是否真正糖基化了,如果是,能不能测定糖基化位点呢
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2011-11-17 17:03:25
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直接做个含糖量测定(苯酚硫酸法)就行了,含糖量的多少来确定糖基化程度。其次还可以确定是N-glycan还是O-glycan,再采用PNGase F 或O-糖苷酶进行酶切后进行质谱分析!
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当别人都在假装正经的时候,我就假装不正经。
10楼
2015-01-20 10:43:28
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【答案】应助回帖
糖苷酶消化后跑电泳,或者HPLC
糖基化肯定是有的,糖基化程度不好说。比真核细胞的厉害点,比酿酒酵母的轻很多。
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2楼
2011-11-17 17:25:43
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能 用质谱能找到糖基化位点的~ 最近听的基因组学方面的讲座比较作 都提到质谱了
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几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
3楼
2011-11-17 20:32:37
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fungixx
at 2011-11-17 20:32:37:
能 用质谱能找到糖基化位点的~ 最近听的基因组学方面的讲座比较作 都提到质谱了
MS是不要要求样品的纯度很高啊
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4楼
2011-11-18 08:28:16
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