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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于western上样
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blastfeng

金虫 (小有名气)

[交流] 关于western上样 已有13人参与

做WB时，为了上样量达到一致，我们老板让我数细胞，按照细胞的数量确定蛋白，我用的是血球板计数，发现一点都不准确，有没有更好点的方法呢，现在国际上通用的方法又是什么呢？有哪位师兄师姐给点好的建议了，谢谢了
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生活就像PCR
1楼 2011-11-16 17:29:19
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

2011加油

银虫 (正式写手)
★ ★
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wanhscn(金币+1): 鼓励交流! 2011-11-17 00:22:04
首先测定蛋白浓度后，根据你的上样量，取质量相同的各组蛋白样品，体积不同时，用TBST溶液把体积也补齐，再加5乘的loading buffer就行了。
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每天都是新开始，2011，要好好努力！
3楼2011-11-16 19:23:45
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0620602

铜虫 (初入文坛)
★ ★
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西瓜(金币+1): Good！ 2011-11-17 18:50:27
先做个考染，看下大致量，然后找个内参，微调上样量就行了
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5楼2011-11-17 08:20:22
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普通回帖

blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
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wanhscn(金币+1): 鼓励交流 2011-11-17 00:21:51
测定蛋白浓度不行吗？
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jiayoubashaonian
2楼2011-11-16 18:54:38
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dnaxxx

至尊木虫 (小有名气)
★ ★
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西瓜(金币+1): good 2011-11-17 18:50:07
一般是提蛋白质后测浓度，数细胞的话不能保证每个步骤都得到一样的产率
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4楼2011-11-17 07:59:20
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2011加油

银虫 (正式写手)
★ ★
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西瓜(金币+1): 很好的补充 2011-11-17 18:50:45
引用回帖:
5楼: Originally posted by 0620602 at 2011-11-17 08:20:22:
先做个考染，看下大致量，然后找个内参，微调上样量就行了

对，摸索上样量时，考染也是非常有用的，能够判别上样量是多是少，同时也能看看目的条带的表达在胶上是模糊还是清晰，从而有利于你考虑是否需要适度的增加或减少上样量。
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每天都是新开始，2011，要好好努力！
6楼2011-11-17 08:31:59
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0624410024

金虫 (正式写手)

Begging for knowledge
★
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个人觉得你们老板的方法还是有可取支出的哈！俺是支持你们老板的做法的~~~
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每天坚持多一点，以后困难少一点！
7楼2011-11-18 14:01:54
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feitigking

金虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
一定要测蛋白浓度的 这个方法很多也不复杂
用actin等内参的方法也可以，不过之后要定量需做图谱密度分析
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8楼2011-11-18 15:20:38
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涛声依旧本人

银虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
你可以考虑买试剂盒测总蛋白含量，我们这边有用这个测的，你可以查查
蛋白定量：BCA蛋白浓度测定试剂盒(增强型)
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9楼2011-11-19 11:10:33
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xueshu110

禁虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
wanhscn(金币+2): 鼓励分享！ 2011-12-17 09:02:19
本帖内容被屏蔽
10楼2011-11-19 11:34:04
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