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zhaoyonggang

银虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+3): 鼓励交流 2011-11-23 21:00:51
一般是要测蛋白量的。不过样品少得时候，如果对样品的浓度没有数的话，我喜欢走个浓度梯度再考马斯染色，感觉比测总蛋白更可靠些。不过，如果是从6孔板直接制备样品，只要保证铺板的细胞数目一致，可以直接用SDS sample buffer裂解细胞，一般各个孔的蛋白浓度大致是一致的。
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11楼2011-11-19 11:38:13
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卓玄同

木虫 (正式写手)
不太懂哎
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12楼2011-11-19 12:16:00
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blastfeng

金虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 0624410024 at 2011-11-18 14:01:54:
个人觉得你们老板的方法还是有可取支出的哈！俺是支持你们老板的做法的~~~

那你是怎么做的啊？能不能说说哈
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生活就像PCR
13楼2011-11-20 12:56:16
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noah1020

新虫 (小有名气)
★ ★ ★
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西瓜(金币+2): 严谨的做法，结果不漂亮都难，哈哈 2011-11-23 21:03:13
我也这样做的！但是都不行，所以我现在都用特土的办法：内参！
就是先计数定量或者用Lowry简单定一下，然后直接先跑内参~ 根据内参亮度再琢磨一下，第二次调整上样量，再跑，出来的条带就特一致了...
很土，但是条带很好看
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14楼2011-11-23 16:01:14
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blastfeng

金虫 (正式写手)
引用回帖:
14楼: Originally posted by noah1020 at 2011-11-23 16:01:14:
我也这样做的！但是都不行，所以我现在都用特土的办法：内参！
就是先计数定量或者用Lowry简单定一下，然后直接先跑内参~ 根据内参亮度再琢磨一下，第二次调整上样量，再跑，出来的条带就特一致了...
很土，但是 ...

细胞计数仪计的准确么？有没有用的同学
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生活就像PCR
15楼2011-11-23 17:30:12
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noah1020

新虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+2): 鼓励交流 2011-12-17 12:21:52
引用回帖:
15楼: Originally posted by blastfeng at 2011-11-23 17:30:12:
细胞计数仪计的准确么？有没有用的同学

我们楼上实验室有用的，计数当然很准确，但是你不能保证每个细胞内的目的蛋白含量是一致的，所以就算是计数相同，出来的条带也可能亮度不一致~ 我计数都是自己数...土着呢...
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16楼2011-11-24 08:51:40
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xiayuxue2006

金虫 (初入文坛)
★ ★ ★
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西瓜(金币+2): 鼓励新虫交流 2011-12-17 12:22:03
我们是提取蛋白后仪器测蛋白浓度，然后上一致的质量，如果不齐的话，再灰度值扫描内参，再调整
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17楼2011-12-16 21:46:49
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lingxingcao

新虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
蛋白定量啊，数细胞也太麻烦了吧。
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18楼2011-12-26 19:43:58
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