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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于western上样
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blastfeng

金虫 (小有名气)

[交流] 关于western上样 已有13人参与

做WB时，为了上样量达到一致，我们老板让我数细胞，按照细胞的数量确定蛋白，我用的是血球板计数，发现一点都不准确，有没有更好点的方法呢，现在国际上通用的方法又是什么呢？有哪位师兄师姐给点好的建议了，谢谢了
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生活就像PCR
1楼 2011-11-16 17:29:19
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2011加油

银虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+1): 很好的补充 2011-11-17 18:50:45
引用回帖:
5楼: Originally posted by 0620602 at 2011-11-17 08:20:22:
先做个考染，看下大致量，然后找个内参，微调上样量就行了

对，摸索上样量时，考染也是非常有用的，能够判别上样量是多是少，同时也能看看目的条带的表达在胶上是模糊还是清晰，从而有利于你考虑是否需要适度的增加或减少上样量。
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每天都是新开始，2011，要好好努力！
6楼2011-11-17 08:31:59
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
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wanhscn(金币+1): 鼓励交流 2011-11-17 00:21:51
测定蛋白浓度不行吗？
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jiayoubashaonian
2楼2011-11-16 18:54:38
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2011加油

银虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
wanhscn(金币+1): 鼓励交流! 2011-11-17 00:22:04
首先测定蛋白浓度后，根据你的上样量，取质量相同的各组蛋白样品，体积不同时，用TBST溶液把体积也补齐，再加5乘的loading buffer就行了。
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每天都是新开始，2011，要好好努力！
3楼2011-11-16 19:23:45
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dnaxxx

至尊木虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+1): good 2011-11-17 18:50:07
一般是提蛋白质后测浓度，数细胞的话不能保证每个步骤都得到一样的产率
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4楼2011-11-17 07:59:20
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