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RNA总量鉴定时A260/280比值偏低还能挽救嘛?
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新虫
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专业: 骨、关节、软组织退行性病
[
求助
]
RNA总量鉴定时A260/280比值偏低还能挽救嘛?
各位老湿,战友,
小弟提的RNA总量测定时A260/280为1.3左右,这个该怎么办啊?因为样本有限,这批样本还能挽救嘛?1.3这个值可以继续后面的逆转录和定量PCR嘛?(RNA提取用的是Trizol的方法)
谢谢,不胜感激!
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1楼
2011-11-02 17:01:10
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longrna
新虫
(正式写手)
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虫号: 1473815
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性别: GG
专业: 生物化学
【答案】应助回帖
1.比值低最可能的原因是由于有蛋白污染。你做的是什么样品?使用多少样品量?最终产量如何?电泳结果如何?
2..你使用什么仪器测的OD? OD260及OD280的读数分别是多少?有些仪器在其吸光值偏低时(如低于0.1)得出来的比值就不准确了,可信度不高。
3.如果不是由于测OD引起的比值低,而RNA产量可观,则可以使用Trizol再抽提一次(产量会损失40-60%).
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伟大航线....
2楼
2011-11-03 09:49:04
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xiaohaozi9876
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注册: 2008-05-26
性别: GG
专业: 生物大分子结构与功能
【答案】应助回帖
井的左上方(金币+5): 谢谢~~~那我还是做下试试吧 2011-11-07 09:07:10
1. A260/280值只是一个参考,实际操作中,1.4~1.8范围内为正常值,1.3我也觉得是正常值,虽然理论上的最优值是2.0
2.RT-PCR需要的RNA Concentration是2ug/ul,不需要担心。直接做吧!
3.做完不行,那就re-purify your sample。祝好运。
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Onceinamoment,wethinkoneselfgrowup,oneday,wefinallyfound...
3楼
2011-11-04 18:43:57
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