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井的左上方

新虫 (初入文坛)

[求助] RNA总量鉴定时A260/280比值偏低还能挽救嘛?

各位老湿,战友,
       小弟提的RNA总量测定时A260/280为1.3左右,这个该怎么办啊?因为样本有限,这批样本还能挽救嘛?1.3这个值可以继续后面的逆转录和定量PCR嘛?(RNA提取用的是Trizol的方法)
       谢谢,不胜感激!
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longrna

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

1.比值低最可能的原因是由于有蛋白污染。你做的是什么样品?使用多少样品量?最终产量如何?电泳结果如何?
2..你使用什么仪器测的OD? OD260及OD280的读数分别是多少?有些仪器在其吸光值偏低时(如低于0.1)得出来的比值就不准确了,可信度不高。
3.如果不是由于测OD引起的比值低,而RNA产量可观,则可以使用Trizol再抽提一次(产量会损失40-60%).
伟大航线....
2楼2011-11-03 09:49:04
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xiaohaozi9876

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

井的左上方(金币+5): 谢谢~~~那我还是做下试试吧 2011-11-07 09:07:10
1. A260/280值只是一个参考,实际操作中,1.4~1.8范围内为正常值,1.3我也觉得是正常值,虽然理论上的最优值是2.0
2.RT-PCR需要的RNA Concentration是2ug/ul,不需要担心。直接做吧!
3.做完不行,那就re-purify your sample。祝好运。
Onceinamoment,wethinkoneselfgrowup,oneday,wefinallyfound...
3楼2011-11-04 18:43:57
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