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笔冰河

银虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
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在线: 44.6小时
虫号: 1111763
注册: 2010-09-30
性别: MM
专业: 生物大分子结构与功能

[求助] 目的片段与表达载体的连接

1kb的目的片段与PET-19b连接，转化DH5a，平板培养16小时无菌落。做了空载体转化的对照，14小时平板菌落长得很好，也就是问题出在连接，怎么优化连接呢，有什么需要注意的？
PS: 连接体系 14μl 目的片段，3μl 酶切载体，2μl buffer，1μl T4连接酶。（带有目的片段的T载体和PET载体都是用试剂盒提，使用相同的酶切体系）

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1楼2011-11-02 10:48:22

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lingxingcao

新虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
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虫号: 873406
注册: 2009-10-15
专业: 生物化学

引用回帖:

10楼: Originally posted by 笔冰河 at 2011-11-02 21:49:18:
LB平板，只加了Amp，其它都没加

推荐你用solutionI连接试剂盒，只要连0.5h就好了。

22楼2011-11-07 09:31:01

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