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xuhua257

木虫 (小有名气)

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[求助] 有关RT-PCR内参基因

最近做为新手，开始做RT-PCR，自己设计的引物。做了两次PCR后，发现内参基因没有扩出来，另外一个基因倒是跑出来了，我做的原料是青花菜，退火温度是50℃。希望高手们帮我分析下。万分感谢！
图在附件中。
前面4个泳道是Actin，第5道是marker, 后面是扩出来的青花菜的基因。

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1楼 2011-10-20 19:14:01

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银虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

xuhua257(金币+10): 是同一模板可能是引物不合格吧另外一个基因都扩出来了说明RNA没有降解啊谢谢了！ 2011-10-21 11:19:45
xuhua257(金币+10): 2011-11-18 14:43:35

个人认为：引物不合格，重新设计。
内参极好P，没有一点带只能说明引物的问题。
1.引物设计问题。
2.靶基因序列错误。

PS.都用的同一模板？RT前确认RNA没降解，反转录没问题。

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2楼2011-10-21 09:02:46

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