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小丫的维尼熊

木虫 (小有名气)

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[交流] 荧光定量PCR无 Ct 值（信号）出现的解决对策已有1人参与

1.1  反应循环数不够：一般都要在 35 个循环以上，可根据实验情况增加循环，但高于45个循环会增加过多的背景信号。
1.2  检测荧光信号的步骤有误：一般采用 72℃延伸时采集荧光，Taqman 方法则一般在退火结束或延伸结束采集信号。
1.3  引物或探针降解：可通过PAGE电泳检测其完整性。
1.4  探针设计不佳：设计探针温度低于引物，造成探针未杂交上而产物已延伸。
1.5  模板量少：对未知浓度的样品应从系列稀释样品的最高浓度做起。
1.6  模板降解：避免样品制备中杂质的引入以及模板反复冻融的情况发生。

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