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皇马铁卫

铜虫 (正式写手)

[求助] 谁给我讲一下SDS-PAGE浓缩胶的作用

SDS-PAGE中浓缩胶具体原理是什么啊?哪位童鞋给我讲讲~
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【分子生物】EPI帖 蛋白质生物学

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laokuang1988

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

皇马铁卫(金币+2): 谢谢 2011-10-13 21:48:14
我觉得是因为浓缩胶浓度较小,在跑浓缩胶的时候,电压又比跑分离胶的时候小,蛋白可以差不多一起跑到同一条水平线上,并进入分离胶。
2楼2011-10-13 21:12:59
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doublehelix

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
皇马铁卫(金币+3): 谢谢 2011-10-13 21:48:18
wanhscn(金币+2): Good! 2011-10-14 00:16:21
西瓜(金币+3, MolEPI+1): Good! 2011-11-02 01:52:40
大致是以下情况:浓缩胶是pH6.7,分离胶pH8.9;电泳缓冲液使用的Tris-甘氨酸缓冲系统。在浓缩胶中,其pH环境呈弱酸性,因此甘氨酸解离很少,其在电场的作用下,泳动效率低;而CL离子却很高,两者之间形成导电性较低的区带,蛋白分子就介于二者之间泳动。由于导电性与电场强度成反比,这一区带便形成了较高的电压递度,压着蛋白质分子聚集到一起,浓缩为一狭窄的区带。当样品进入分离胶后,由于胶中pH的增加,呈碱性,甘氨酸大量解离,泳动速率增加,直接紧随氯离子之后,同时由于分离胶孔径的缩小,在电场的作用下,蛋白分子根据其固有的带电性和分子大小进行分离。
3楼2011-10-13 21:19:33
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皇马铁卫

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by doublehelix at 2011-10-13 21:19:33:
大致是以下情况:浓缩胶是pH6.7,分离胶pH8.9;电泳缓冲液使用的Tris-甘氨酸缓冲系统。在浓缩胶中,其pH环境呈弱酸性,因此甘氨酸解离很少,其在电场的作用下,泳动效率低;而CL离子却很高,两者之间形成导电性较 ...

再问一下,为什么跑DNA不要浓缩胶?谢谢~
春晓赏花,夏日听蝉,箫吹秋月,酒饮冬霜~
4楼2011-10-13 21:56:15
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asznpb

木虫 (正式写手)


wanhscn(金币+1): 不急,慢慢解释! 2011-10-14 00:17:54
……胶的形状,加样孔的位置,电泳的模式……我知道你又该问为什么蛋白质电泳不能和核酸电泳一样了……
显微镜下的世界很精彩!
5楼2011-10-13 23:15:26
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doublehelix

木虫 (著名写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 皇马铁卫 at 2011-10-13 21:56:15:
再问一下,为什么跑DNA不要浓缩胶?谢谢~

没必要呀,呵呵,琼脂糖跑电泳直接根据样品分子大小来分离,效果很好呀
6楼2011-10-14 09:59:34
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vanvan

木虫 (小有名气)

作用是使样品进入分离胶前被浓缩成狭窄的扁盘,从而提高分离效果
机遇与挑战并存,梦想与困难共生
7楼2011-10-14 21:39:38
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