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thestormcong

银虫 (小有名气)

[交流] 求助16sv3区结果分析 已有8人参与

这是本人的16sv3区扩增产物,模板为16spcr全序列,引物为v3区通用引物,结果显示该区很宽,是不是有非特异性扩增,能否直接进行下一步的DGGE,请教各位能够指点,非常感谢!
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红多多

木虫 (正式写手)

版筑饭牛的日子


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
1949stone(MolEPI+1): 鼓励 2011-10-07 23:27:25
建议你用QIAGEN的盒子,这个贵点,但是考虑到你对细菌定量的准确性这个绝对物有所值!另外你如果16s出来的结果是单一条带,那理论上出来的出来的应该是单一条带。但是也不排除多种条带的可能。你这个多做几遍试试把。不行的话就整个上胶。不过这个和DGGE的功能优势貌似有点不符~~
另外说点个人的看法啊,你用基因组扩增16S全长,在这个过程中其实原始细菌的量反应在你PCR结果上应该就不准了,因为通用引物对每种细菌16S的扩增效率是不一样的,这样出来的结果本来就不准确了,然后你在用这个不准的结果再次用DGGE引物扩增,这个貌似就更不靠谱了。所以我个人认为这样做欠妥。个人看法,仅供参考哈。
可以用QQ找我……
6楼2011-10-07 23:13:17
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红多多

木虫 (正式写手)

版筑饭牛的日子

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
西瓜(金币+1): 鼓励 2011-10-10 17:26:07
我们实验室做DGGE第一步PCR出来的结果是非常单一的一条带,你这个貌似是不可以直接上胶的。引物应该都是现成的,你模版用的是什么地方提取出来的菌啊,总DNA可能提的不是很好。还有你这个貌似是用自己的相机在紫外板上照的把,这样的图投文章别人不认的……
可以用QQ找我……
2楼2011-10-07 22:28:51
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thestormcong

银虫 (小有名气)

非常感谢您的指点!我这个土壤是一位留学生从外国带来的,土壤DNA提取用的是生工的柱式提取试剂盒,该图的确是用自己相机拍的。那请问您我是需要重新提取基因组吗?是不是基因组的16sV3区扩增出来都是很单一的条带啊,我这个又是什么原因呢。另外该V3pcr产物的模板是16s全序列,16s全序列pcr结果条带还是比较单一的呢。直接拿基因组当模板扩v3区没能扩增出来。
3楼2011-10-07 22:41:14
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thestormcong

银虫 (小有名气)

引用回帖:
1楼: Originally posted by thestormcong at 2011-10-07 22:18:04:
这是本人的16sv3区扩增产物,模板为16spcr全序列,引物为v3区通用引物,结果显示该区很宽,是不是有非特异性扩增,能否直接进行下一步的DGGE,请教各位能够指点,非常感谢!
[eimg]20/11/1410070_1317996763_705. ...

非常感谢您的指点!我这个土壤是一位留学生从外国带来的,土壤DNA提取用的是生工的柱式提取试剂盒,该图的确是用自己相机拍的。那请问您我是需要重新提取基因组吗?是不是基因组的16sV3区扩增出来都是很单一的条带啊,我这个又是什么原因呢。另外该V3pcr产物的模板是16s全序列,16s全序列pcr结果条带还是比较单一的呢。直接拿基因组当模板扩v3区没能扩增出来。
4楼2011-10-07 22:43:02
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