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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » sal 及 sph 两个酶切位点用过的请指教
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lilylove170

新虫 (小有名气)

[求助] sal 及 sph 两个酶切位点用过的请指教

5- GTAAGCATGCGGAGGAAAGTAGTTATGACTGAT -3（SphⅠ）
5- TGCGGTCGACACTTTAGACAGTATACACG -3（SalⅠ）
rt
上面的引物中保护碱基及酶切位点没有错误吧？说什么都连不上，谢谢 好心人帮助
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1楼 2011-10-07 21:23:06
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lilylove170

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 红多多 at 2011-10-08 00:02:45:
序列设计的没问题
SalⅠ这个酶貌似效率不是很高，还有我记得这个好像酶和甘油的比例比较高，具体好像是因为甘油会导致酶切的专一性发生变化。所以你在酶切体系里面应该尽量少给点酶，然后通过延长反应时间来弥补 ...

您说的很有道理，我最后也是按照这样的思路来改进的，等待明天的结果，bless
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3楼2011-10-08 19:32:59
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红多多

木虫 (正式写手)

版筑饭牛的日子

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-10-08 08:04:20
lilylove170(金币+1): 2011-10-08 19:32:20
序列设计的没问题
SalⅠ这个酶貌似效率不是很高，还有我记得这个好像酶和甘油的比例比较高，具体好像是因为甘油会导致酶切的专一性发生变化。所以你在酶切体系里面应该尽量少给点酶，然后通过延长反应时间来弥补。另外你要是怕保护碱基不怎么给力可以考虑连T载然后双酶切。
赞一下(2人) 回复此楼
可以用QQ找我……
2楼2011-10-08 00:02:45
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wzqno

金虫 (小有名气)
★
西瓜(金币+1): 鼓励交流 2011-10-08 20:28:22
也有可能是你的双酶切buffer不合适，问问技术顾问有没有通用的双酶切buffer，胶回收效率有没有考虑过？？浓度太低也是不容易连接的
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4楼2011-10-08 19:58:44
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lushan_ds

新虫 (初入文坛)
可以分两次单酶切 效果可能会好一些
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5楼2014-12-22 19:58:29
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