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lilylove170

新虫 (小有名气)

[求助] sal 及 sph 两个酶切位点用过的请指教

5- GTAAGCATGCGGAGGAAAGTAGTTATGACTGAT -3(SphⅠ)
5- TGCGGTCGACACTTTAGACAGTATACACG -3(SalⅠ)
rt
上面的引物中保护碱基及酶切位点没有错误吧?说什么都连不上,谢谢 好心人帮助
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红多多

木虫 (正式写手)

版筑饭牛的日子

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-10-08 08:04:20
lilylove170(金币+1): 2011-10-08 19:32:20
序列设计的没问题
SalⅠ这个酶貌似效率不是很高,还有我记得这个好像酶和甘油的比例比较高,具体好像是因为甘油会导致酶切的专一性发生变化。所以你在酶切体系里面应该尽量少给点酶,然后通过延长反应时间来弥补。另外你要是怕保护碱基不怎么给力可以考虑连T载然后双酶切。
可以用QQ找我……
2楼2011-10-08 00:02:45
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lilylove170

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 红多多 at 2011-10-08 00:02:45:
序列设计的没问题
SalⅠ这个酶貌似效率不是很高,还有我记得这个好像酶和甘油的比例比较高,具体好像是因为甘油会导致酶切的专一性发生变化。所以你在酶切体系里面应该尽量少给点酶,然后通过延长反应时间来弥补 ...

您说的很有道理,我最后也是按照这样的思路来改进的,等待明天的结果,bless
3楼2011-10-08 19:32:59
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wzqno

金虫 (小有名气)


西瓜(金币+1): 鼓励交流 2011-10-08 20:28:22
也有可能是你的双酶切buffer不合适,问问技术顾问有没有通用的双酶切buffer,胶回收效率有没有考虑过??浓度太低也是不容易连接的
4楼2011-10-08 19:58:44
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lushan_ds

新虫 (初入文坛)

可以分两次单酶切 效果可能会好一些
5楼2014-12-22 19:58:29
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