应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » sal 及 sph 两个酶切位点用过的请指教
51/1返回列表
查看: 2417  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

lilylove170

新虫 (小有名气)

[求助] sal 及 sph 两个酶切位点用过的请指教

5- GTAAGCATGCGGAGGAAAGTAGTTATGACTGAT -3（SphⅠ）
5- TGCGGTCGACACTTTAGACAGTATACACG -3（SalⅠ）
rt
上面的引物中保护碱基及酶切位点没有错误吧？说什么都连不上，谢谢 好心人帮助
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-10-07 21:23:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

红多多

木虫 (正式写手)

版筑饭牛的日子

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-10-08 08:04:20
lilylove170(金币+1): 2011-10-08 19:32:20
序列设计的没问题
SalⅠ这个酶貌似效率不是很高，还有我记得这个好像酶和甘油的比例比较高，具体好像是因为甘油会导致酶切的专一性发生变化。所以你在酶切体系里面应该尽量少给点酶，然后通过延长反应时间来弥补。另外你要是怕保护碱基不怎么给力可以考虑连T载然后双酶切。
赞一下(2人) 回复此楼
可以用QQ找我……
2楼2011-10-08 00:02:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lilylove170

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 红多多 at 2011-10-08 00:02:45:
序列设计的没问题
SalⅠ这个酶貌似效率不是很高，还有我记得这个好像酶和甘油的比例比较高，具体好像是因为甘油会导致酶切的专一性发生变化。所以你在酶切体系里面应该尽量少给点酶，然后通过延长反应时间来弥补 ...

您说的很有道理，我最后也是按照这样的思路来改进的，等待明天的结果，bless
赞一下 回复此楼
3楼2011-10-08 19:32:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wzqno

金虫 (小有名气)
★
西瓜(金币+1): 鼓励交流 2011-10-08 20:28:22
也有可能是你的双酶切buffer不合适，问问技术顾问有没有通用的双酶切buffer，胶回收效率有没有考虑过？？浓度太低也是不容易连接的
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-10-08 19:58:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lushan_ds

新虫 (初入文坛)
可以分两次单酶切 效果可能会好一些
赞一下 回复此楼
5楼2014-12-22 19:58:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 lilylove170 的主题更新
51/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 (EPI+-1)(金币-50) +3 cqwQDCxMcL3I 2026-09-29 4/200 2026-09-30 16:52 by Z9YWQ5EAO3qp
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 cqwQDCxMcL3I 2026-09-29 6/300 2026-09-30 16:26 by Z9YWQ5EAO3qp
[考研] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 cqwQDCxMcL3I 2026-09-29 6/300 2026-09-30 16:14 by Z9YWQ5EAO3qp
[教师之家] 某top大学教授说“能够在市场中兑现的能力才是真能力”无比同意！ +10 zju2000 2026-09-26 13/650 2026-09-30 10:26 by yexuqing
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 4/200 2026-09-29 16:47 by yCO1Ll7aHtsw
[博后之家] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 3/150 2026-09-29 16:30 by etmYJ6d2rquH
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 tqUTOxClQUMF 2026-09-28 3/150 2026-09-29 15:46 by etmYJ6d2rquH
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 tqUTOxClQUMF 2026-09-28 4/200 2026-09-29 15:15 by etmYJ6d2rquH
[博后之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 tqUTOxClQUMF 2026-09-28 3/150 2026-09-29 15:04 by etmYJ6d2rquH
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 tqUTOxClQUMF 2026-09-28 3/150 2026-09-29 14:58 by etmYJ6d2rquH
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 GDBe8tDZqE8z 2026-09-28 6/300 2026-09-29 14:41 by etmYJ6d2rquH
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 CfXuS1rDhLYN 2026-09-28 3/150 2026-09-29 14:24 by etmYJ6d2rquH
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +6 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 7/350 2026-09-29 14:07 by etmYJ6d2rquH
[博后之家] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 3/150 2026-09-29 13:56 by etmYJ6d2rquH
[公派出国] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 5/250 2026-09-29 13:50 by etmYJ6d2rquH
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 tqUTOxClQUMF 2026-09-28 3/150 2026-09-29 09:59 by JzYBbHIXWSrW
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 tqUTOxClQUMF 2026-09-28 3/150 2026-09-28 23:46 by b8fCuTHqckEt
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 CfXuS1rDhLYN 2026-09-28 4/200 2026-09-28 22:55 by ez6fGg9abYaj
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 6/300 2026-09-28 22:15 by ez6fGg9abYaj
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 CfXuS1rDhLYN 2026-09-28 3/150 2026-09-28 19:08 by 9lS3ad5oOymn
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭