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yicao917

木虫 (小有名气)

[交流] 降落PCR和梯度PCR

大家有没有遇到梯度PCR扩的好而降落PCR扩不好或扩不出来的情况啊
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1楼 2011-10-07 20:10:42
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红多多

木虫 (正式写手)
★
yicao917(金币+1):谢谢参与
1949stone(MolEPI+1): 鼓励 2011-10-07 23:28:22
呵呵 这个非常符合降落PCR的行为特征啊 降落的是每个循环或者隔几个循环退火温度降低一点的 这种情况就是刚开始退火温度高，非特异性扩增几乎没有，但是扩增效率是非常低，慢慢的退火温度下降了，扩增效率会高一点，但是非特异扩增就来了，总之整个过程中就是扩增效率慢慢变高，但是非特异扩增也慢慢变多，反应在你PCR结果就是你的引物被很多不必要的非特异性扩增浪费了。于是你看到的就是什么都没有，其实理论上应该是有的，但是量上面嘛，明显是不够的。降落pcr无非就是梯度PCR摸条件的偷懒版本，有时候样品比较少什么的才用，我一般也就做RACE的时候用用。你要是实在要用降落，提高引物浓度试试。
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2楼2011-10-07 22:21:05
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yicao917

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 红多多 at 2011-10-07 22:21:05:
呵呵 这个非常符合降落PCR的行为特征啊 降落的是每个循环或者隔几个循环退火温度降低一点的 这种情况就是刚开始退火温度高，非特异性扩增几乎没有，但是扩增效率是非常低，慢慢的退火温度下降了，扩增效率会高一点 ...

对于降落提高酶浓度或者增加循环数来增加产量可行吗？
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3楼2011-10-08 11:45:11
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红多多

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by yicao917 at 2011-10-08 11:45:11:
对于降落提高酶浓度或者增加循环数来增加产量可行吗？

可以试试，这个又不麻烦……
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4楼2011-10-08 11:47:03
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