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yicao917

木虫 (小有名气)

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[交流] 降落PCR和梯度PCR

大家有没有遇到梯度PCR扩的好而降落PCR扩不好或扩不出来的情况啊

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1楼2011-10-07 20:10:42

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yicao917

木虫 (小有名气)

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引用回帖:

2楼: Originally posted by 红多多 at 2011-10-07 22:21:05:
呵呵这个非常符合降落PCR的行为特征啊降落的是每个循环或者隔几个循环退火温度降低一点的这种情况就是刚开始退火温度高，非特异性扩增几乎没有，但是扩增效率是非常低，慢慢的退火温度下降了，扩增效率会高一点 ...

对于降落提高酶浓度或者增加循环数来增加产量可行吗？

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3楼2011-10-08 11:45:11

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红多多

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★
yicao917(金币+1):谢谢参与
1949stone(MolEPI+1): 鼓励 2011-10-07 23:28:22

呵呵这个非常符合降落PCR的行为特征啊降落的是每个循环或者隔几个循环退火温度降低一点的这种情况就是刚开始退火温度高，非特异性扩增几乎没有，但是扩增效率是非常低，慢慢的退火温度下降了，扩增效率会高一点，但是非特异扩增就来了，总之整个过程中就是扩增效率慢慢变高，但是非特异扩增也慢慢变多，反应在你PCR结果就是你的引物被很多不必要的非特异性扩增浪费了。于是你看到的就是什么都没有，其实理论上应该是有的，但是量上面嘛，明显是不够的。降落pcr无非就是梯度PCR摸条件的偷懒版本，有时候样品比较少什么的才用，我一般也就做RACE的时候用用。你要是实在要用降落，提高引物浓度试试。

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2楼2011-10-07 22:21:05

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