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降落PCR和梯度PCR
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| 大家有没有遇到梯度PCR扩的好而降落PCR扩不好或扩不出来的情况啊 |
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 【分子生物】EPI帖 |
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yicao917(金币+1):谢谢参与
1949stone(MolEPI+1): 鼓励 2011-10-07 23:28:22
yicao917(金币+1):谢谢参与
1949stone(MolEPI+1): 鼓励 2011-10-07 23:28:22
| 呵呵 这个非常符合降落PCR的行为特征啊 降落的是每个循环或者隔几个循环退火温度降低一点的 这种情况就是刚开始退火温度高，非特异性扩增几乎没有，但是扩增效率是非常低，慢慢的退火温度下降了，扩增效率会高一点，但是非特异扩增就来了，总之整个过程中就是扩增效率慢慢变高，但是非特异扩增也慢慢变多，反应在你PCR结果就是你的引物被很多不必要的非特异性扩增浪费了。于是你看到的就是什么都没有，其实理论上应该是有的，但是量上面嘛，明显是不够的。降落pcr无非就是梯度PCR摸条件的偷懒版本，有时候样品比较少什么的才用，我一般也就做RACE的时候用用。你要是实在要用降落，提高引物浓度试试。 |
2楼2011-10-07 22:21:05
3楼2011-10-08 11:45:11
4楼2011-10-08 11:47:03