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红色日历

木虫 (小有名气)

[求助] 这是我跑的PCR电泳图,求高手指点!

第一道是marker,后面的是跑的梯度,但是条带都不是很明显,一片一片的。我的目的片段是257bp,求高手给指点迷津。
我跑的三十个循环,一个师姐说增加循环数看看能不能好点,但是另一个师姐说要降低循环数,否则面积更大。。。。
呜呜,我刚刚开始做,什么都不懂,到底该听谁的啊?有没有哪位高手指点一下怎样分析电泳图结果,优化实验条件啊?不胜感激!!!

[ Last edited by 红色日历 on 2011-9-16 at 11:13 ]
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红色日历

木虫 (小有名气)

我的图怎么发不上去啊
6楼2011-09-16 13:06:37
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红色日历

木虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 豆豆鱼 at 2011-09-16 21:40:34:
把图片放上来再帮你看看。

先谢谢喽!

8楼2011-09-16 21:51:58
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红色日历

木虫 (小有名气)

引用回帖:
14楼: Originally posted by 张小逸 at 2011-09-30 09:16:34:
你的目的片段数是怎么知道的啊?是已知的还是怎么?谢谢

那只是个大概的,设计兼并引物之间的距离
15楼2011-10-30 13:14:33
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红色日历

木虫 (小有名气)

引用回帖:
13楼: Originally posted by 科研人 at 2011-09-25 18:29:04:
我建议你检查下 引物的退火温度 是不是有点低,特异性怎么样,回头比对下;如果没问题的话,可以适当提高退火温度,增加循环数!!

谢谢,呵呵
17楼2011-11-18 23:12:32
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红色日历

木虫 (小有名气)

引用回帖:
16楼: Originally posted by tjd0928 at 2011-10-30 20:53:17:
产生了非特异性条带,下面的一个条带是目的片段,上面的是非目的片段。不知道你做这个PCR的目的是什么,如果要测序的话目的片段割胶回收就可以了。如果只是要观察条带特异性,那1、提高退火温度  2、重新设计引物。

最终还是重新设计引物。。。
18楼2011-11-18 23:13:18
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