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wangyan8111

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
红色日历(金币+2): 有一条带是我想要的,挺接近的,现在再做一遍试试,再不行我就重头来过,呵呵,谢谢哦! 2011-09-19 11:50:52
adslye(金币+2): 鼓励交流~ 2011-09-25 09:20:35
电泳这边问题不大,主要还是PCR这边,扩出来的东西是不是你要的呀。两条带呀,如果自己操作没问题的话,考虑考虑引物吧
谁说兽医只负责euthanasia
11楼2011-09-17 13:56:02
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xiaoaqiu

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
adslye(金币+2): 鼓励交流~ 2011-09-25 09:20:44
PCR两条带亮度基本一样,所以建议考虑引物特异性,另外可以提高退火温度,另外建议降低电泳过程电压。
12楼2011-09-24 21:28:19
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科研人

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我建议你检查下 引物的退火温度 是不是有点低,特异性怎么样,回头比对下;如果没问题的话,可以适当提高退火温度,增加循环数!!
13楼2011-09-25 18:29:04
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张小逸

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
1楼: Originally posted by 红色日历 at 2011-09-16 11:10:09:
第一道是marker,后面的是跑的梯度,但是条带都不是很明显,一片一片的。我的目的片段是257bp,求高手给指点迷津。
我跑的三十个循环,一个师姐说增加循环数看看能不能好点,但是另一个师姐说要降低循环数,否则 ...

你的目的片段数是怎么知道的啊?是已知的还是怎么?谢谢
14楼2011-09-30 09:16:34
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红色日历

木虫 (小有名气)

引用回帖:
14楼: Originally posted by 张小逸 at 2011-09-30 09:16:34:
你的目的片段数是怎么知道的啊?是已知的还是怎么?谢谢

那只是个大概的,设计兼并引物之间的距离
15楼2011-10-30 13:14:33
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tjd0928

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

产生了非特异性条带,下面的一个条带是目的片段,上面的是非目的片段。不知道你做这个PCR的目的是什么,如果要测序的话目的片段割胶回收就可以了。如果只是要观察条带特异性,那1、提高退火温度  2、重新设计引物。
16楼2011-10-30 20:53:17
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红色日历

木虫 (小有名气)

引用回帖:
13楼: Originally posted by 科研人 at 2011-09-25 18:29:04:
我建议你检查下 引物的退火温度 是不是有点低,特异性怎么样,回头比对下;如果没问题的话,可以适当提高退火温度,增加循环数!!

谢谢,呵呵
17楼2011-11-18 23:12:32
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红色日历

木虫 (小有名气)

引用回帖:
16楼: Originally posted by tjd0928 at 2011-10-30 20:53:17:
产生了非特异性条带,下面的一个条带是目的片段,上面的是非目的片段。不知道你做这个PCR的目的是什么,如果要测序的话目的片段割胶回收就可以了。如果只是要观察条带特异性,那1、提高退火温度  2、重新设计引物。

最终还是重新设计引物。。。
18楼2011-11-18 23:13:18
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