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红色日历

木虫 (小有名气)

[求助] 这是我跑的PCR电泳图,求高手指点!

第一道是marker,后面的是跑的梯度,但是条带都不是很明显,一片一片的。我的目的片段是257bp,求高手给指点迷津。
我跑的三十个循环,一个师姐说增加循环数看看能不能好点,但是另一个师姐说要降低循环数,否则面积更大。。。。
呜呜,我刚刚开始做,什么都不懂,到底该听谁的啊?有没有哪位高手指点一下怎样分析电泳图结果,优化实验条件啊?不胜感激!!!

[ Last edited by 红色日历 on 2011-9-16 at 11:13 ]
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tjd0928

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

产生了非特异性条带,下面的一个条带是目的片段,上面的是非目的片段。不知道你做这个PCR的目的是什么,如果要测序的话目的片段割胶回收就可以了。如果只是要观察条带特异性,那1、提高退火温度  2、重新设计引物。
16楼2011-10-30 20:53:17
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lj20099873

至尊木虫 (职业作家)

日出东海落西山
2楼2011-09-16 11:22:01
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横眉

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

amisking: 乱码啊! 2011-09-16 21:37:15
1???高退???温度 2适当???高模???浓度,循环数30个??试试

[ ????????? http://muchong.com/3g ]
3楼2011-09-16 12:33:20
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横眉

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

1???高退???温度 2适当???高模???浓度,循环数30个??试试

[ ????????? http://muchong.com/3g ]
4楼2011-09-16 12:34:00
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