应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蛋白包涵体透析后杂蛋白很多，请教原因
111/2返回列表12下一页
查看: 3288  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

疯花血月

金虫 (初入文坛)

[交流] 蛋白包涵体透析后杂蛋白很多，请教原因 已有6人参与

我目的蛋白75Kd。蛋白表达后是包涵体，透析3 天后，然后我用超滤管离心，得到的蛋白跑胶，右边第四个条带。为什么包涵体透析后杂蛋白这么多呢？是因为蛋白是我浓缩后的原因吗？或者其他的原因


[ Last edited by 疯花血月 on 2011-9-15 at 20:47 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-09-15 20:45:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

healy13

禁虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+2): 鼓励新虫交流 2011-09-16 17:43:27
本帖内容被屏蔽
2楼2011-09-16 11:15:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

疯花血月

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by healy13 at 2011-09-16 11:15:16:
目的条带下面的杂带分子量太小，需用层析技术来除杂。

按说破碎后包涵体泡PAGE胶有杂带，但是杂带不应该这么的亮。难道是因为蛋白是我浓缩后的原因？
赞一下 回复此楼
3楼2011-09-16 21:45:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ganchao1776

至尊木虫 (职业作家)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
dhd997(金币+2): good 2011-09-17 10:42:50
包函怎么还这么杂呀，你这个确实不太好做呀，A600 1.5左右的时候开始25度过夜诱导试试吧，把表达做的好一点，可能就好做多了，另外你的蛋白要是蛋白酶的话浓度高了会自切的，不管有没有酶切位点，浓度做的低点或低温下做会好点的
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2011-09-16 23:35:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ganchao1776

至尊木虫 (职业作家)
★ ★ ★
1949stone(金币+3): 恩 很好 学习下 不过杂带多一般不会是没有洗净 2011-09-17 08:36:21
也有包函体没有洗净的嫌疑，洗的时候用超声波混均匀，有个三四次就会好多了，另外除内毒素的话也可以在这一步做
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2011-09-16 23:38:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

疯花血月

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by ganchao1776 at 2011-09-16 23:35:55:
包函怎么还这么杂呀，你这个确实不太好做呀，A600 1.5左右的时候开始25度过夜诱导试试吧，把表达做的好一点，可能就好做多了，另外你的蛋白要是蛋白酶的话浓度高了会自切的，不管有没有酶切位点，浓度做的低点或低 ...

我也觉得温度降低诱导试一下了
赞一下 回复此楼
6楼2011-09-21 12:00:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

imfly77

木虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+5): Good！ 2011-09-21 17:27:15
（1）从小条带的亮度来看，你做的包涵体蛋白很可能有大小亚基。或者也有可能有另一种蛋白共同过量表达。
（2）要除掉小蛋白，可以在目的蛋白上加上Histag，表达后将沉淀用8M尿素溶解，在变性条件（8M尿素）过Ni柱纯化。
赞一下(2人) 回复此楼
7楼2011-09-21 15:30:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

穿白大褂约会

禁言 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
8楼2015-09-25 21:46:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1213902993

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
8楼: Originally posted by 穿白大褂约会 at 2015-09-25 21:46:32
先将包涵体用高浓度的尿素溶解，过柱纯化一下，再复性吧。上图包涵体洗涤的不够纯~~~

如何复性，试剂如何配。能否发一下？
赞一下 回复此楼
9楼2015-09-26 13:53:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

saly40zz

禁言 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本帖内容被屏蔽
10楼2015-10-20 16:40:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 疯花血月 的主题更新
111/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 化学调剂0703 +8 啊我我的 2026-03-11 8/400 2026-03-16 17:23 by 我的船我的海
[考研] 0703一志愿211 285分求调剂 +5 ly3471z 2026-03-13 5/250 2026-03-16 16:16 by 哦哦123
[考研] 材料与化工专硕调剂 +3 heming3743 2026-03-16 3/150 2026-03-16 15:05 by peike
[考研] 327求调剂 +6 拾光任染 2026-03-15 11/550 2026-03-15 22:47 by 拾光任染
[考研] 求老师收留调剂 +4 jiang姜66 2026-03-14 5/250 2026-03-15 20:11 by Winj1e
[考研] 288求调剂 +4 奇点0314 2026-03-14 4/200 2026-03-14 23:04 by JourneyLucky
[考研] 080500，材料学硕302分求调剂学校 +4 初识可乐 2026-03-14 5/250 2026-03-14 21:08 by peike
[考研] 265求调剂 +4 威化饼07 2026-03-12 4/200 2026-03-14 17:23 by userper
[考研] 331求调剂（0703有机化学 +5 ZY-05 2026-03-13 6/300 2026-03-14 10:51 by Jy?
[考研] 一志愿安徽大学材料工程专硕313分，求调剂的学校 +8 Yu先生 2026-03-10 10/500 2026-03-14 01:04 by JourneyLucky
[考研] 调剂 +3 13853210211 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:47 by JourneyLucky
[考研] 26考研调剂 +3 ying123. 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:18 by JourneyLucky
[考研] 341求调剂 +3 番茄头--- 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:07 by JourneyLucky
[考研] 337一志愿华南理工0805材料求调剂 +7 mysdl 2026-03-11 9/450 2026-03-13 22:43 by JourneyLucky
[考研] 308求调剂 +5 是Lupa啊 2026-03-11 5/250 2026-03-13 22:13 by JourneyLucky
[考研] 材料工程调剂 +9 咪咪空空 2026-03-12 9/450 2026-03-13 22:05 by 星空星月
[考研] 26调剂/材料/英一数二/总分289/已过A区线 +6 步川酷紫123 2026-03-13 6/300 2026-03-13 21:59 by 星空星月
[考研] 一志愿山大07化学 332分 四六级已过 本科山东双非 求调剂！ +3 不想理你 2026-03-12 3/150 2026-03-13 14:18 by JourneyLucky
[考研] 296求调剂 +3 大口吃饭 身体健 2026-03-13 3/150 2026-03-13 10:31 by 学员8dgXkO
[考研] 298求调剂 +3 Vv呀！ 2026-03-10 3/150 2026-03-10 22:40 by 剑诗杜康
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭