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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蛋白包涵体透析后杂蛋白很多，请教原因
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疯花血月

金虫 (初入文坛)

[交流] 蛋白包涵体透析后杂蛋白很多，请教原因 已有6人参与

我目的蛋白75Kd。蛋白表达后是包涵体，透析3 天后，然后我用超滤管离心，得到的蛋白跑胶，右边第四个条带。为什么包涵体透析后杂蛋白这么多呢？是因为蛋白是我浓缩后的原因吗？或者其他的原因


[ Last edited by 疯花血月 on 2011-9-15 at 20:47 ]
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1楼 2011-09-15 20:45:09
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imfly77

木虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★
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西瓜(金币+5): Good！ 2011-09-21 17:27:15
（1）从小条带的亮度来看，你做的包涵体蛋白很可能有大小亚基。或者也有可能有另一种蛋白共同过量表达。
（2）要除掉小蛋白，可以在目的蛋白上加上Histag，表达后将沉淀用8M尿素溶解，在变性条件（8M尿素）过Ni柱纯化。
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7楼2011-09-21 15:30:33
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healy13

禁虫 (小有名气)
★ ★ ★
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西瓜(金币+2): 鼓励新虫交流 2011-09-16 17:43:27
本帖内容被屏蔽
2楼2011-09-16 11:15:16
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疯花血月

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by healy13 at 2011-09-16 11:15:16:
目的条带下面的杂带分子量太小，需用层析技术来除杂。

按说破碎后包涵体泡PAGE胶有杂带，但是杂带不应该这么的亮。难道是因为蛋白是我浓缩后的原因？
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3楼2011-09-16 21:45:06
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ganchao1776

至尊木虫 (职业作家)
★ ★ ★
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dhd997(金币+2): good 2011-09-17 10:42:50
包函怎么还这么杂呀，你这个确实不太好做呀，A600 1.5左右的时候开始25度过夜诱导试试吧，把表达做的好一点，可能就好做多了，另外你的蛋白要是蛋白酶的话浓度高了会自切的，不管有没有酶切位点，浓度做的低点或低温下做会好点的
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4楼2011-09-16 23:35:55
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