应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 综合其他 » 小麦叶片RNA实时荧光Ct值过高
51/1返回列表
查看: 1692  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 APEPI ，点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

一曲清心

新虫 (初入文坛)

[求助] 小麦叶片RNA实时荧光Ct值过高

小虫最近想做小麦叶片RNA的表达分析，cDNA做了1、2、4、8、16、32、64、128倍的稀释梯度，用内参GAPDH跑，怎么Ct值都在32~34之间啊？居然浓度高的Ct值比浓度低的Ct值大！扩增效率没问题，有的浓度下重复不是很稳定，求高手帮忙解释。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
庄稼不收得年年种！
1楼 2011-08-27 17:41:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hxsm

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
jhu132llh(金币+3): good,引经据典，鼓励热心虫友积极应助 2011-08-29 16:52:35
具体的荧光定量还是比较复杂的，你可以试试做做NTC，就是没有做反转录的RNA为模板试试，看有没有基因组的污染，你做的溶解曲线咋样，扩增特异性，还有引物设计等等，有些荧光定量试剂盒是对于引物是有他自己的要求。。。荧光定量最重要的一个是模板一个是你的样品，还有就是你的试验设计。。。看你上面说的，你做这个试验时间长吗，你稀释的时候样品混匀有点问题，还有就是加样品的时候是不是标准，一般枪头上最后的一滴也是要加进去的。。。慢慢试试，，，
赞一下(1人) 回复此楼
静水深流
5楼2011-08-29 11:07:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

27927025

金虫 (正式写手)
我也不知道，也遇到相似问题
赞一下 回复此楼
2楼2011-08-27 17:45:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hxsm

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

一曲清心(金币+10): 10 2011-08-27 22:33:05
amisking(APEPI+1): 鼓励应助 2011-08-27 23:34:38
看看，你的RNA纯度，还有反转录是不是标准的，之后就是CDNA稀释后要用手弹均匀，不可用力过度，一般很少出现荧光结果不稳定的，还有你的荧光定量过高，可能是你的基因表达浓度过低，基因表达丰度低。。。内参基因咋样？内参可以换个试试。。。
赞一下(1人) 回复此楼
静水深流
3楼2011-08-27 19:47:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

一曲清心

新虫 (初入文坛)
★ ★
jhu132llh(金币+2): good 2011-08-28 08:39:48
引用回帖:
3楼: Originally posted by hxsm at 2011-08-27 19:47:48:
看看，你的RNA纯度，还有反转录是不是标准的，之后就是CDNA稀释后要用手弹均匀，不可用力过度，一般很少出现荧光结果不稳定的，还有你的荧光定量过高，可能是你的基因表达浓度过低，基因表达丰度低。。。内参基因 ...

A260/280在2.0~2.2，用的罗氏的反转试剂盒，稀释时是用枪头吸打的。晚上又做了一遍稀释2倍、8倍、32倍，Ct降小了，值都在26左右，还是分不开，仪器显示的扩增效率在90%~110%之间。重复之间误差较大....
赞一下(1人) 回复此楼
庄稼不收得年年种！
4楼2011-08-27 22:38:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 复试调剂 +7 积极向上； 2026-04-10 9/450 2026-04-11 07:09 by laoshidan
[考研] 调剂 +12 卷卷卷心菜_ 2026-04-09 13/650 2026-04-10 22:36 by Ftglcn90
[考研] 281求调剂 +9 觉得好的吧 2026-04-10 9/450 2026-04-10 22:16 by 猪会飞
[考研] 307求调剂 +8 tzq94092 2026-04-10 8/400 2026-04-10 17:33 by 286640313
[考研] 一志愿京区985，085401电子信息，本科电子信息 +3 阳光开朗的男孩 2026-04-10 3/150 2026-04-10 16:29 by sophia_93
[硕博家园] 0856材料化工求调剂，一志愿211，初试成绩349 +5 江淮北月 2026-04-05 5/250 2026-04-10 16:26 by 高维春
[考研] 一志愿东北大学控制工程085406数二英二385，求调剂 +6 Ezra_Zhang 2026-04-09 6/300 2026-04-10 16:23 by 高维春
[考研] 一志愿华中农微生物，288分，三年实验经历 +10 代fish 2026-04-09 10/500 2026-04-10 09:49 by potato妹
[考研] 080100力学316求调剂 +7 L_Hairui 2026-04-07 7/350 2026-04-10 09:45 by vgtyfty
[考研] 308求调剂 +21 倘若起风了呢 2026-04-05 21/1050 2026-04-10 08:13 by Sammy2
[考研] 085404，285分求调剂 +12 薇薇考研 2026-04-07 14/700 2026-04-09 23:10 by parmtree
[考研] 材料专硕(0856) 339分求调剂 +9 哈哈哈鹅哈哈哈 2026-04-09 10/500 2026-04-09 20:01 by Orcid
[考研] 269求调剂 +7 跪求收留。 2026-04-04 7/350 2026-04-09 19:06 by 探123
[考研] 一志愿厦大生物学332求调剂 +10 池池池池池池 2026-04-08 10/500 2026-04-09 17:10 by 独醉梦孤城
[考研] 262求调剂 +10 天下第一文 2026-04-04 13/650 2026-04-09 15:16 by 探123
[考研] 化学工程与技术专业一志愿哈工程 291分B区 国家级大创负责人 有一作论文 +13 Emmy~ 2026-04-09 13/650 2026-04-09 14:47 by only周
[考研] 材料专硕(0856) 339分求调剂 +16 哈哈哈鹅哈哈哈 2026-04-05 16/800 2026-04-08 16:02 by luoyongfeng
[考研] 277求调剂 +4 考研调剂lxh 2026-04-06 6/300 2026-04-08 10:40 by 逆水乘风
[考研] 297分083200求助 +9 aekx 2026-04-05 9/450 2026-04-06 20:57 by flysky1234
[考研] 一志愿9材料学硕297已过六级求调剂推荐 +11 adaie 2026-04-04 12/600 2026-04-05 19:04 by 蓝云思雨
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭