应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 综合其他 » 小麦叶片RNA实时荧光Ct值过高
51/1返回列表
查看: 1684  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 APEPI ，点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

一曲清心

新虫 (初入文坛)

[求助] 小麦叶片RNA实时荧光Ct值过高

小虫最近想做小麦叶片RNA的表达分析，cDNA做了1、2、4、8、16、32、64、128倍的稀释梯度，用内参GAPDH跑，怎么Ct值都在32~34之间啊？居然浓度高的Ct值比浓度低的Ct值大！扩增效率没问题，有的浓度下重复不是很稳定，求高手帮忙解释。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
庄稼不收得年年种！
1楼 2011-08-27 17:41:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hxsm

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

一曲清心(金币+10): 10 2011-08-27 22:33:05
amisking(APEPI+1): 鼓励应助 2011-08-27 23:34:38
看看，你的RNA纯度，还有反转录是不是标准的，之后就是CDNA稀释后要用手弹均匀，不可用力过度，一般很少出现荧光结果不稳定的，还有你的荧光定量过高，可能是你的基因表达浓度过低，基因表达丰度低。。。内参基因咋样？内参可以换个试试。。。
赞一下(1人) 回复此楼
静水深流
3楼2011-08-27 19:47:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

27927025

金虫 (正式写手)
我也不知道，也遇到相似问题
赞一下 回复此楼
2楼2011-08-27 17:45:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

一曲清心

新虫 (初入文坛)
★ ★
jhu132llh(金币+2): good 2011-08-28 08:39:48
引用回帖:
3楼: Originally posted by hxsm at 2011-08-27 19:47:48:
看看，你的RNA纯度，还有反转录是不是标准的，之后就是CDNA稀释后要用手弹均匀，不可用力过度，一般很少出现荧光结果不稳定的，还有你的荧光定量过高，可能是你的基因表达浓度过低，基因表达丰度低。。。内参基因 ...

A260/280在2.0~2.2，用的罗氏的反转试剂盒，稀释时是用枪头吸打的。晚上又做了一遍稀释2倍、8倍、32倍，Ct降小了，值都在26左右，还是分不开，仪器显示的扩增效率在90%~110%之间。重复之间误差较大....
赞一下(1人) 回复此楼
庄稼不收得年年种！
4楼2011-08-27 22:38:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hxsm

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
jhu132llh(金币+3): good,引经据典，鼓励热心虫友积极应助 2011-08-29 16:52:35
具体的荧光定量还是比较复杂的，你可以试试做做NTC，就是没有做反转录的RNA为模板试试，看有没有基因组的污染，你做的溶解曲线咋样，扩增特异性，还有引物设计等等，有些荧光定量试剂盒是对于引物是有他自己的要求。。。荧光定量最重要的一个是模板一个是你的样品，还有就是你的试验设计。。。看你上面说的，你做这个试验时间长吗，你稀释的时候样品混匀有点问题，还有就是加样品的时候是不是标准，一般枪头上最后的一滴也是要加进去的。。。慢慢试试，，，
赞一下(1人) 回复此楼
静水深流
5楼2011-08-29 11:07:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 还有化工二轮调剂的学校吗 5+12 化工人999 2026-04-09 46/2300 2026-04-10 23:28 by 314126402
[考研] 083200 305分 求二轮调剂 不接受跨专业 +9 Claireyyyy 2026-04-09 10/500 2026-04-10 21:21 by Claireyyyy
[考研] 22408 366分，本科211，一志愿西工大 +4 Rubt 2026-04-09 4/200 2026-04-10 19:51 by chemisry
[考研] 343求调剂 +5 王国帅 2026-04-10 5/250 2026-04-10 16:56 by 猪会飞
[考研] 材料工程302分求调剂 +18 zyx上岸！ 2026-04-04 18/900 2026-04-10 10:07 by 314126402
[考研] 274求调剂 +5 山阿蔓 2026-04-07 5/250 2026-04-09 15:28 by 18828373951
[考研] 070300化学279求调剂 +17 哈哈哈^_^ 2026-04-08 18/900 2026-04-09 10:49 by 三七七想上岸
[考研] 软件工程求调剂22软工296分求调剂，接受跨调 +4 yangchen2017 2026-04-08 5/250 2026-04-08 21:56 by 土木硕士招生
[考研] 318求调剂 +13 ykyhsa 2026-04-05 15/750 2026-04-08 21:37 by wj165256
[考研] 土木水利专硕276分求调剂 +6 我想上学！！6 2026-04-05 9/450 2026-04-08 17:45 by 宋小宝HQ
[考研] 电子信息346 +4 zuoshaodian 2026-04-08 4/200 2026-04-08 11:54 by zzucheup
[考研] 307求调剂 +14 超级伊昂大王 2026-04-06 14/700 2026-04-08 07:03 by 无际的草原
[考博] 博士申请 +3 IQwQl 2026-04-05 3/150 2026-04-07 20:31 by greychen00
[考研] 327考研调剂推荐 +6 呜呜呜呜呢 2026-04-06 6/300 2026-04-06 21:39 by 啵啵啵0119
[考研] 一志愿河北工业大学材料工程，初试344求专硕调剂 +6 15933906766 2026-04-05 6/300 2026-04-06 13:21 by 无际的草原
[考研] 工科370求调剂 +3 溏心煎鸡蛋 2026-04-05 3/150 2026-04-06 10:55 by 这是一个无聊的�
[考研] 283求调剂 +5 baiiyu 2026-04-05 6/300 2026-04-05 20:35 by 啵啵啵0119
[考研] 一志愿青科085500，初试295分，公共课213分 +3 遇到的人愿望都� 2026-04-05 3/150 2026-04-05 18:45 by 蓝云思雨
[考研] 313求调剂 +5 海日海日 2026-04-04 7/350 2026-04-05 13:58 by imissbao
[考研] 材料383求调剂 +5 郭阳阳阳成 2026-04-04 5/250 2026-04-04 19:06 by dongzh2009
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭