24小时热门版块排行榜    

查看: 2771  |  回复: 13
本帖产生 1 个 BioEPI ,点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

寂寞强强

铜虫 (正式写手)

[求助] 提质粒遇到问题

今天用试剂盒提取质粒,结果上午提质粒后用3ul样品+1ulbuffer跑胶6组都能发现质粒,我们组的最清晰(第一张图的marker左边第二条带),下午酶切(大概2-2.5h)后把载体的酶切产物(100ul体系+20ul 6*buffer)跑胶结果都没有发现质粒的条带。大家说说是怎么回事呢?难道是Buffer加多了,还是酶切出问题了?

还有,昨天提质粒的时候,一格marker一格质粒,我们组跑胶时间比较长,质粒那条带在迁移过程中有一些不明显的条带在10000bp的地方有个模糊的条带,这个可能是什么?怎么会有这个东西


回复此楼
Stayhungry,stayfoolish……
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

寂寞强强

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by wanhscn at 2011-08-26 21:54:16:
大家说说是怎么回事呢?难道是Buffer加多了,还是酶切出问题了?
提的量少了,强行梅切,时间长了,切光了


质粒那条带在迁移过程中有一些不明显的条带在10000bp的地方有个模糊的条带,这个可能是什么?
可 ...

质粒双酶切后,一个26bp的肯定跑丢了,还有一个将近5000bp的开环部分,需要跑胶之后回收,但是没有找到,跑胶的时间大概有20分钟,应该够了吧
Stayhungry,stayfoolish……
7楼2011-08-26 23:26:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答

cexoihtydx

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

楼主介绍的太模糊了!请提供以下信息:
1 质粒大小
2 单酶切 or 双酶切?
3 酶切目的片段大小?
4 电泳图中mark大小?
5 最后一幅图是酶切后电泳图吗?
不放弃,日子总有阳光,追求总有希望!
2楼2011-08-26 21:33:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wanhscn

木虫 (职业作家)

哲学@草根

【答案】应助回帖

★ ★
lstt09nk(金币+2): 感谢交流 2011-08-27 10:41:51
大家说说是怎么回事呢?难道是Buffer加多了,还是酶切出问题了?
提的量少了,强行梅切,时间长了,切光了


质粒那条带在迁移过程中有一些不明显的条带在10000bp的地方有个模糊的条带,这个可能是什么?
可能是基因组DNA
真相是最大的奢侈品
3楼2011-08-26 21:54:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wanhscn

木虫 (职业作家)

哲学@草根

【答案】应助回帖

或者那个条带是开环的质粒,他比环状的要慢
真相是最大的奢侈品
4楼2011-08-26 21:55:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
信息提示
请填处理意见