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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 提质粒遇到问题
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寂寞强强

铜虫 (正式写手)

[求助] 提质粒遇到问题

今天用试剂盒提取质粒，结果上午提质粒后用3ul样品+1ulbuffer跑胶6组都能发现质粒，我们组的最清晰（第一张图的marker左边第二条带），下午酶切（大概2-2.5h）后把载体的酶切产物（100ul体系+20ul 6*buffer）跑胶结果都没有发现质粒的条带。大家说说是怎么回事呢？难道是Buffer加多了，还是酶切出问题了？

还有，昨天提质粒的时候，一格marker一格质粒，我们组跑胶时间比较长，质粒那条带在迁移过程中有一些不明显的条带在10000bp的地方有个模糊的条带，这个可能是什么？怎么会有这个东西
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Stayhungry，stayfoolish……
1楼 2011-08-26 20:02:15
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wanhscn

木虫 (职业作家)

哲学@草根

【答案】应助回帖

或者那个条带是开环的质粒，他比环状的要慢
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真相是最大的奢侈品
4楼2011-08-26 21:55:21
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cexoihtydx

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

楼主介绍的太模糊了！请提供以下信息：
1 质粒大小
2 单酶切 or 双酶切？
3 酶切目的片段大小？
4 电泳图中mark大小？
5 最后一幅图是酶切后电泳图吗？
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不放弃，日子总有阳光，追求总有希望！
2楼2011-08-26 21:33:46
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wanhscn

木虫 (职业作家)

哲学@草根

【答案】应助回帖

★ ★
lstt09nk(金币+2): 感谢交流 2011-08-27 10:41:51
大家说说是怎么回事呢？难道是Buffer加多了，还是酶切出问题了？
提的量少了，强行梅切，时间长了，切光了


质粒那条带在迁移过程中有一些不明显的条带在10000bp的地方有个模糊的条带，这个可能是什么？
可能是基因组DNA
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真相是最大的奢侈品
3楼2011-08-26 21:54:16
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寂寞强强

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
1楼: Originally posted by 寂寞强强 at 2011-08-26 20:02:15:
今天用试剂盒提取质粒，结果上午提质粒后用3ul样品+1ulbuffer跑胶6组都能发现质粒，我们组的最清晰（第一张图的marker左边第二条带），下午酶切（大概2-2.5h）后把载体的酶切产物（100ul体系+20ul 6*buffer）跑胶 ...

我们用的是Top10菌株，质粒大小在5000bp左右。用的双酶切，要切下来一个大概26bp的片段，这个肯定跑胶就没有了，剩下的开环部分跑胶之后要回收，这部分将近5000bp，不应该找不到啊。第二张图的Marker清楚一些，从上到下分别是12000、10000、7500、5000。最后一张图是昨天提质粒的图，今天提质粒没有观察到结果，调了分辨率和亮度也找不到
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Stayhungry，stayfoolish……
5楼2011-08-26 23:21:34
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