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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 土壤真菌PCR，引物选择问题
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bear0329

金虫 (正式写手)

[求助] 土壤真菌PCR，引物选择问题

各位虫友：
      大家好!我是做土壤DNA提取后，用通用引物对真菌ITS片段进行PCR扩增，目的条带很暗，条件和体系优化后效果不好。我想问是不是引物问题呢？一般土壤真菌ITS序列的通用引物用哪些呢？谢谢！！
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以马内利！
1楼 2011-08-23 16:18:46
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bear0329

金虫 (正式写手)
送鲜花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by bear0329 at 2011-08-26 08:09:51:

1332
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以马内利！
4楼2011-08-29 14:00:09
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zhengsx

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
bear0329(金币+1): 谢谢啊~扩出来都是很淡的，加大了酶量稍微好点 2011-08-24 15:28:57
dhd997(金币+3): good 2011-08-24 19:35:06
bear0329(金币+1): 2011-08-28 21:15:29
有2个问题需要注意：（1）总DNA是否腐殖酸高，颜色越深则越是。解决的办法是提取时减少土样或增加提取药品的量；PCR前对总DNA进行稀释。（2）引物的选择。也可采用nested PCR。
赞一下(2人) 回复此楼
坚持，看准的一定要坚持
2楼2011-08-24 11:22:06
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匿名

用户注销 (初入文坛)
本帖仅楼主可见
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6楼2011-10-18 14:55:47
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bear0329

金虫 (正式写手)
我后来用了试剂盒提取了，效果还好，条带完整，也可以P出来
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以马内利！
7楼2011-10-20 10:00:06
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