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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » RT_pcr后续PCR时有时无
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新虫 (正式写手)

[交流] RT_pcr后续PCR时有时无 已有2人参与

没停顿一气做完RT—pcr后，拿着产物再做pcr，条带刚开始出现一次，后面再也没有了。我的引物是用从公司购买的DEPC处理的水溶解的，是不是因为DEPC分解产生得乙醇抑制酶活性呢？
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1楼 2011-08-22 19:05:34
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ganchao1776

至尊木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
我想说的有两点
1.反转录pcr钓基因，一次PCR能出来单一的条带很不容易；你第一次做的结果就很好；通常在反转录后的第一次PCR用普通的Taq酶（优点是好p），只要出现明显的亮带就割下回收，以回收物分别为模板再次用高保真的DNA聚合酶PCR，通常就可经得到很好的结果了
2.RT-PCR反转录产物保存后再用会出很多的问题，建议你这一步聚重新做，具体原因我也无法解释
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3楼2011-08-29 01:22:57
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linyanfei

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
溶解引物用灭菌的dd水就可以了，你的条带拖带比较明显，试着提高一下温度吧
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2楼2011-08-28 20:40:55
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