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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » WB检测磷酸化蛋白
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geek23

木虫 (小有名气)

[求助] WB检测磷酸化蛋白

各位大侠,有用过CST的磷酸化抗体检测磷酸化蛋白的吗?请问在整个提蛋白以及WB过程中有什么注意事项?小女最近做了几个抗体都没有条带.急~~~
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Bethechangeyouwishtosee.
1楼2011-08-15 10:23:24
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qingyuansw20

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
adslye(金币+3): 认真的回复，感谢您~祝顺利！ 2011-08-17 10:31:21
引用回帖:
3楼: Originally posted by qingyuansw20 at 2011-08-15 16:48:37:
CST的抗体应该不错，但不知你的是单克隆还是多克隆，没有条带，是不是磷酸化没有形成。磷酸化有时形成的时间比较短，做实验时要严格对待。

1、看文献，看看攻略，到底你这个实验条件下什么时间，多大浓度才有最好的磷酸化。
2、可以自己摸，不同时间如6h、18h、36h、54h。四个条件分别做，找出两个时间段较好结果，然后取中间时间再试验。
3、最后能找个已经报道过的成熟的刺激条件，无论是什么药的。（阳性对照），提出蛋白看有没有磷酸化形成。排除是你wb的实验问题。要是wb没问题那就肯定是没形成磷酸化。
4、实验就是这样自己一点一点摸。
赞一下(2人) 回复此楼
6楼2011-08-16 18:37:57
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AZURESKY1999

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

也想做此类相关的课题，但并不是太懂，友情帮顶
赞一下 回复此楼
2楼2011-08-15 16:26:06
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qingyuansw20

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
adslye(金币+1): 鼓励交流~祝顺利！ 2011-08-15 17:49:33
geek23(金币+5): 请问楼上.我主要是做药物处理后一些蛋白的表达,我一般是加药后48H提蛋白.你的意思是说缩短时间间隔吗?谢谢你的回答. 2011-08-16 16:49:42
CST的抗体应该不错，但不知你的是单克隆还是多克隆，没有条带，是不是磷酸化没有形成。磷酸化有时形成的时间比较短，做实验时要严格对待。
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3楼2011-08-15 16:48:37
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geek23

木虫 (小有名气)
请问楼上.我主要是做药物处理后一些蛋白的表达,我一般是加药后48H提蛋白.你的意思是说缩短时间间隔吗?谢谢你的回答.
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Bethechangeyouwishtosee.
4楼2011-08-16 16:49:04
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