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geek23

木虫 (小有名气)

[求助] WB检测磷酸化蛋白

各位大侠,有用过CST的磷酸化抗体检测磷酸化蛋白的吗?请问在整个提蛋白以及WB过程中有什么注意事项?小女最近做了几个抗体都没有条带.急~~~
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Bethechangeyouwishtosee.
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qingyuansw20

金虫 (小有名气)

★ ★ ★
adslye(金币+3): 认真的回复,感谢您~祝顺利! 2011-08-17 10:31:21
引用回帖:
3楼: Originally posted by qingyuansw20 at 2011-08-15 16:48:37:
CST的抗体应该不错,但不知你的是单克隆还是多克隆,没有条带,是不是磷酸化没有形成。磷酸化有时形成的时间比较短,做实验时要严格对待。

1、看文献,看看攻略,到底你这个实验条件下什么时间,多大浓度才有最好的磷酸化。
2、可以自己摸,不同时间如6h、18h、36h、54h。四个条件分别做,找出两个时间段较好结果,然后取中间时间再试验。
3、最后能找个已经报道过的成熟的刺激条件,无论是什么药的。(阳性对照),提出蛋白看有没有磷酸化形成。排除是你wb的实验问题。要是wb没问题那就肯定是没形成磷酸化。
4、实验就是这样自己一点一点摸。
6楼2011-08-16 18:37:57
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AZURESKY1999

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

也想做此类相关的课题,但并不是太懂,友情帮顶
2楼2011-08-15 16:26:06
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qingyuansw20

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


adslye(金币+1): 鼓励交流~祝顺利! 2011-08-15 17:49:33
geek23(金币+5): 请问楼上.我主要是做药物处理后一些蛋白的表达,我一般是加药后48H提蛋白.你的意思是说缩短时间间隔吗?谢谢你的回答. 2011-08-16 16:49:42
CST的抗体应该不错,但不知你的是单克隆还是多克隆,没有条带,是不是磷酸化没有形成。磷酸化有时形成的时间比较短,做实验时要严格对待。
3楼2011-08-15 16:48:37
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geek23

木虫 (小有名气)

请问楼上.我主要是做药物处理后一些蛋白的表达,我一般是加药后48H提蛋白.你的意思是说缩短时间间隔吗?谢谢你的回答.
Bethechangeyouwishtosee.
4楼2011-08-16 16:49:04
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