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qurande

金虫 (小有名气)

[求助] 求教关于用QIAquick PCR Purification Kit 是否能用来回收双酶切过的pcr产物

QIAquick PCR Purification Kit  是否能用来回收 双酶切处理的pcr产物 及双酶切处理过的空载体？
说明书相关的内容如下
                            from sllution
                              PCR                  YES
              restriction digestion           YES
              tailing:
              DNA fragments                  YES
             Oligonucleotides                  no
因为实验室的传统是用这个盒子回收条带单一的pcr产物，省的切胶回收
最近我的pcr产物比较小，切胶回收率太低，想试试这个，不知道pcr产物双酶切处理及空载体双酶切处理之后，能不能用这个盒子回收？不知道有人用过否，效率怎么样
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1楼 2011-08-09 16:25:25
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空谷幽风

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

上面的回复很专业
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a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
4楼2011-08-10 15:10:54
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summerjane

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
qurande(金币+1): 恩，很专业，和我后来看到的说明书上的一样 2011-08-10 15:17:20
西瓜(金币+3): Good 2011-08-10 18:18:37
西瓜(金币+2, MolEPI+1): 因为试剂盒的柱子能结合大于100bp的片段 2011-08-10 18:22:09
如果酶切过的PCR产物的长度大于100bp，你可以使用这个Kit纯化PCR产物.
如果双酶切处理之后两个MCS之间的酶切片段长度小于100bp，您也可以使用此Kit回收酶切处理之后的空载体
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2楼2011-08-09 18:09:09
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imfly77

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, MolEPI+1): Good！ 2011-08-10 18:20:48
胶回收的目的是为了彻底去除干扰的杂带。比如在你的实验里，建议载体还是用胶回收的盒子，因为载体双切后的小片段很可能不能被纯化掉而干扰连接反应（导致出现很多假阳性）；纯化后最后的载体目的片段终浓度到20 ng/ul，对于一般的克隆来说也是够了的。
PCR产物的话，一般来说只要产物比较纯，双切后的碎片对实验影响不大，是可以直接用PCR产物纯化试剂盒纯化的。
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3楼2011-08-10 15:05:24
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