24小时热门版块排行榜    

查看: 2197  |  回复: 14
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

long2502

金虫 (小有名气)


[交流] 问题请教-western blotting

最近小弟在做WB,使用的是HRP-ECL发光法:将A、B发光液按等比例稀释混合均匀滴在PVDF膜上,然后暴光显影(时间大于五分钟),能把目的条带显出来,但是我的内参显示不出,最后用DAB显影,可以看到明显的内参的带。
请问师兄师姐,师弟师妹,大哥大姐,小弟小妹们,why? how to tackle the problem.
Thank you.

[ Last edited by 1949stone on 2011-8-7 at 11:31 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

» 抢金币啦!回帖就可以得到:

查看全部散金贴

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lzpbar

至尊木虫 (著名写手)



long2502(金币+1):谢谢参与
没做过。友情帮顶。。
5楼2011-08-05 18:52:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 15 个回答

KinnerHuang

新虫 (初入文坛)



long2502(金币+1):谢谢参与
首先恭喜你做出来啦!理论上内参也显示不出来 你加的一抗、二抗跟目的蛋白结合的 不跟内参结合的; HRP在二抗上 不跟内参结合 内参怎么会显影呢?
2楼2011-08-04 10:27:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

long2502

金虫 (小有名气)


我的意思,能把目的条带做出来。然后再加B-actin一抗,过夜,然后加B-actin二抗,然后去显影,但就是显不出来了。就算我延长暴光时间还是白版了。目的条
带能显出来,说明提的蛋白或者跑胶,转膜都没有多大问题了。
3楼2011-08-04 19:31:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

晴天1882

木虫 (正式写手)



long2502(金币+1):谢谢参与
也不知道你在哪里提取的蛋白,会不会是此种内参蛋白不表达?根本没有内参蛋白,所以加完抗体也没有,重新选个内参看看
4楼2011-08-05 18:16:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
2011-08-06 21:14   回复  
long2502(金币+1):谢谢参与
引用回帖:
7楼: Originally posted by 明若瞳兮 at 2011-08-06 21:11:34: 很可能是抗体不好了~~新配个抗体试试吧

2011-08-05 19:20   回复  
long2502(金币+1):谢谢参与
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 081700 调剂 267分 +4 迷人的哈哈 2026-03-23 4/200 2026-03-23 13:02 by ztnimte
[考研] 考研化学308分求调剂 +5 你好明天你好 2026-03-23 6/300 2026-03-23 11:02 by 素颜倾城1988
[考研] 070300化学求调剂 +5 苑豆豆 2026-03-20 5/250 2026-03-23 09:39 by guoliang1816
[考研] 一志愿070300浙大化学358分,求调剂! +4 酥酥鱼.. 2026-03-21 4/200 2026-03-23 08:12 by Iveryant
[考研] 一志愿东华大学化学070300,求调剂 +7 2117205181 2026-03-21 8/400 2026-03-22 22:55 by chixmc
[考研] 280分求调剂 一志愿085802 +4 PUMPT 2026-03-22 7/350 2026-03-22 22:13 by 星空星月
[考研] 311求调剂 +6 冬十三 2026-03-18 6/300 2026-03-22 20:18 by edmund7
[考研] 306求调剂 +5 来好运来来来 2026-03-22 5/250 2026-03-22 16:17 by BruceLiu320
[考研] 能源材料化学课题组招收硕士研究生8-10名 +5 脱颖而出 2026-03-16 17/850 2026-03-22 15:18 by 脱颖而出
[考研] 269专硕求调剂 +6 金恩贝 2026-03-21 6/300 2026-03-22 14:31 by ColorlessPI
[考研] 一志愿北京化工大学070300 学硕336求调剂 +5 vv迷 2026-03-21 8/400 2026-03-22 14:20 by ColorlessPI
[考研] 材料 271求调剂 +5 展信悦_ 2026-03-21 5/250 2026-03-21 17:29 by 学员8dgXkO
[考研] 085601调剂 358分 +3 zzzzggh 2026-03-20 4/200 2026-03-21 10:21 by luoyongfeng
[考研] 一志愿中国石油大学(华东) 本科齐鲁工业大学 +3 石能伟 2026-03-17 3/150 2026-03-21 02:22 by JourneyLucky
[考研] 265求调剂 +9 梁梁校校 2026-03-17 9/450 2026-03-21 02:17 by JourneyLucky
[考研] 材料专硕英一数二306 +7 z1z2z3879 2026-03-18 7/350 2026-03-20 23:48 by JourneyLucky
[考研] 一志愿西南交通 专硕 材料355 本科双非 求调剂 +5 西南交通专材355 2026-03-19 5/250 2026-03-20 21:10 by JourneyLucky
[考研] 0703化学调剂 +5 pupcoco 2026-03-17 8/400 2026-03-19 13:58 by houyaoxu
[考研] 0703化学调剂 +3 妮妮ninicgb 2026-03-17 3/150 2026-03-18 10:29 by macy2011
[考研] 一志愿南京大学,080500材料科学与工程,调剂 +4 Jy? 2026-03-16 4/200 2026-03-17 11:02 by gaoqiong
信息提示
请填处理意见