应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 使用NOVAGEN的His-tag蛋白纯化柱出现的问题
41/1返回列表
查看: 1382  |  回复: 3
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

yeshui

铁虫 (小有名气)

[求助] 使用NOVAGEN的His-tag蛋白纯化柱出现的问题

我过柱子之后，在加elute之前的接样中出现了目的蛋白，但在加elute之后的接样中目的蛋白量很少，而且有杂带，为什么呢？还有就是该怎样清洗柱子呢,每一步中各物质的作用是什么呢？谢谢高人指点
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-07-27 09:24:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★ ★ ★
dhd997(金币+3): good 2011-07-30 13:22:28
没加洗脱液就有目的蛋白质，说明你的蛋白质没能被吸附，可能是填料没处理好，吸附状态不佳；标签被蛋白质折叠进结构内部，吸附不上；你的蛋白质样品中有咪唑？（这个估计不大可能）

洗脱液要设置洗脱梯度，咪唑浓度依次升高，例如20、50、100、150、200、500mM，一般在前面4个梯度就能洗脱完目的蛋白质了。也有可能这4个梯度都能洗脱下来目的蛋白质，那就同时看哪个洗脱液的比较纯。
赞一下(1人) 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

yeshui
流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
2楼2011-07-27 09:54:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yeshui

铁虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-07-27 09:54:26:
没加洗脱液就有目的蛋白质，说明你的蛋白质没能被吸附，可能是填料没处理好，吸附状态不佳；标签被蛋白质折叠进结构内部，吸附不上；你的蛋白质样品中有咪唑？（这个估计不大可能）

洗脱液要设置洗脱梯度，咪唑 ...

样品中没有咪唑啊，我的洗脱梯度是5mM 60mM 1M,那是不是柱子出问题了呢？
赞一下 回复此楼
3楼2011-07-27 10:18:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
5、60、1000mM跨度太大了

带有标签的蛋白质穿透了，要么是层析柱，要么是蛋白质标签被折叠进内部了
赞一下 回复此楼
流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
4楼2011-07-27 10:22:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 yeshui 的主题更新
41/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭