24小时热门版块排行榜    

查看: 1359  |  回复: 3
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

yeshui

铁虫 (小有名气)

[求助] 使用NOVAGEN的His-tag蛋白纯化柱出现的问题

我过柱子之后,在加elute之前的接样中出现了目的蛋白,但在加elute之后的接样中目的蛋白量很少,而且有杂带,为什么呢?还有就是该怎样清洗柱子呢,每一步中各物质的作用是什么呢?谢谢高人指点
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

5、60、1000mM跨度太大了

带有标签的蛋白质穿透了,要么是层析柱,要么是蛋白质标签被折叠进内部了
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
4楼2011-07-27 10:22:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 4 个回答

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

★ ★ ★
dhd997(金币+3): good 2011-07-30 13:22:28
没加洗脱液就有目的蛋白质,说明你的蛋白质没能被吸附,可能是填料没处理好,吸附状态不佳;标签被蛋白质折叠进结构内部,吸附不上;你的蛋白质样品中有咪唑?(这个估计不大可能)

洗脱液要设置洗脱梯度,咪唑浓度依次升高,例如20、50、100、150、200、500mM,一般在前面4个梯度就能洗脱完目的蛋白质了。也有可能这4个梯度都能洗脱下来目的蛋白质,那就同时看哪个洗脱液的比较纯。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
2楼2011-07-27 09:54:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yeshui

铁虫 (小有名气)

送鲜花一朵
引用回帖:
Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-07-27 09:54:26:
没加洗脱液就有目的蛋白质,说明你的蛋白质没能被吸附,可能是填料没处理好,吸附状态不佳;标签被蛋白质折叠进结构内部,吸附不上;你的蛋白质样品中有咪唑?(这个估计不大可能)

洗脱液要设置洗脱梯度,咪唑 ...

样品中没有咪唑啊,我的洗脱梯度是5mM 60mM 1M,那是不是柱子出问题了呢?
3楼2011-07-27 10:18:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 科研孤儿太难了 +19 我4大白菜 2026-08-20 20/1000 2026-08-26 09:49 by zzuzxg
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 13/650 2026-08-26 09:48 by wittyboy
[基金申请] 国合里面能看到了 +5 一怀馨秋 2026-08-26 5/250 2026-08-26 09:26 by 堡主大人
[基金申请] 出来了 +8 trojank 2026-08-26 8/400 2026-08-26 09:00 by gxc
[基金申请] 牛来!米来!面来! +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +8 炎黄贵胄 2026-08-22 9/450 2026-08-26 07:47 by WASM
[基金申请] 今天务委会开完了,明天出结果吗 +18 angus9576 2026-08-25 22/1100 2026-08-26 00:41 by merchancy
[基金申请] 有没有大神帮我看看基金代码 28+4 1234567wang 2026-08-24 10/500 2026-08-25 19:15 by lfy8008
[基金申请] 某些机构,以效率低为荣,以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
[基金申请] 今日不放榜?网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +17 医学老男孩 2026-08-20 22/1100 2026-08-25 15:36 by 医学老男孩
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑,不妨来听听这首《基金之外》 +8 scalable 2026-08-24 8/400 2026-08-25 12:52 by jnhyjjm
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +5 process2012 2026-08-23 7/350 2026-08-25 09:42 by huixian257
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +21 koalala 2026-08-24 24/1200 2026-08-24 19:25 by 家与远方
[基金申请] filecode,4个jtjc了 +14 ziyangfang 2026-08-19 17/850 2026-08-24 18:37 by 哈哈蛤?
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +13 kulium 2026-08-21 16/800 2026-08-24 16:27 by superceng
[基金申请] 让我中一个面上吧! +13 大萍1987 2026-08-20 16/800 2026-08-24 10:23 by 太傻了
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办? +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 时间戳今天,20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧? +4 哈哈蛤? 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
信息提示
请填处理意见